论文部分内容阅读
背景和目的宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。细胞的失控性生长是恶性肿瘤的重要生物学特征之一,手术和放化疗的自身缺陷严重限制了宫颈癌患者的疗效。因此,探索中药等在宫颈癌治疗中应用的可行性具有重要的临床意义。黄芪是常用的补气中药,黄芪多糖(astragalus polysaccharide, APS)是黄芪的主要活性成分之一。研究发现,APS可抑制白血病、胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤细胞的生长。但尚未见APS对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及机制的报道。本研究旨在探讨APS对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及相关机制,为APS在宫颈癌治疗中的临床应用提供科学依据。方法1.提取APS并定量。2.通过细胞生长曲线观察APS对宫颈癌Hela细胞的生长速度和倍增时间的影响。3.通过平板克隆形成实验和流式细胞术观察APS对宫颈癌Hela细胞的克隆形成能力和细胞周期分布的影响。4.通过Western blotting方法观察APS处理前后宫颈癌Hela细胞中细胞周期蛋白A (cyclin A)、cyclin B、cyclin E和p21等细胞生长相关基因表达的变化。结果1.制备的APS水溶液的浓度为53.623mg/mLo2.细胞生长曲线结果显示：100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的APS处理的宫颈癌Hela细胞生长速度均明显慢于未用APS处理的宫颈癌Hela细胞(P<0.01),不同浓度APS处理的宫颈癌Hela细胞的倍增时间显著长于未用APS处理的宫颈癌Hela细胞(P<0.01)。新乡医学院硕士学位论文综合考虑100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的APS对宫颈癌Hela细胞的生长均具有抑制作用和细胞状态的变化,后续实验中,实验组为200μg/mL的APS诱导48h的宫颈癌Hela细胞,对照组为不加药的宫颈癌Hela细胞。3.平板克隆形成实验结果显示：实验组宫颈癌Hela细胞的克隆形成均数显著低于对照组宫颈癌Hela细胞(P<0.01),且克隆体积较小。4.流式细胞术结果显示：与对照组宫颈癌Hela细胞相比,实验组宫颈癌Hela细胞的细胞周期出现G1期阻滞(P<0.01),同时,S期(P<0.01)和G2/M期(P<0.05)细胞减少。5. Western blotting结果显示：实验组宫颈癌Hela细胞中cyclin B和cyclin E的表达显著低于对照组宫颈癌Hela细胞(P<0.01),p21的表达显著高于对照组宫颈癌Hela细胞(P<0.01),而实验组和对照组宫颈癌Hela细胞中cyclin A的表达无显著性差异(P>0.05)。结论1.APS对宫颈癌Hela细胞的生长具有明显的抑制作用。2. cyclin B和cyclin E表达下调及p21表达上调可能与APS对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用有关。