检测禽白血病病毒(ALV)的间接免疫荧光试验建立及我国蛋鸡群中ALV感染的分子流行病学调查

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禽白血病是由禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)引起的禽类多种组织器官发生肿瘤的一类传染性疾病,除造成禽类致瘤性死亡外,其最大的危害表现为免疫抑制、生产性能下降等亚临床症状。ALV可在鸡群中垂直传播,亦能水平传播,种群净化是目前最有效的禽白血病防治措施。近年来,我国蛋鸡群中除感染致病性较强的J亚群ALV(ALV-J)毒株外,A亚群ALV (ALV-A)毒株和B亚群ALV (ALV-B)毒株的感染情况也比较严重。因此,有必要建立检测ALV的方法,以及对我国蛋鸡群中ALV的感染开展分子流行病学调查。本研究从本室保存的5株针对ALV群特异抗原p27的单克隆抗体中,筛选出一株特异性强、敏感性高的单克隆抗体4C7,继而以4C7单抗建立了检测ALV p27抗原的间接免疫荧光试验(IFA)方法。结果显示,该方法能有效检出A、B、J亚群ALV感染,且与禽类其它致瘤性病毒(REV、MDV)无交叉反应;以10TCIDso的ALV感染DF1细胞后24h即可检出,ALV感染DF1细胞后5d的最小病毒检出量为1TCID50,表明所建立的IFA方法特异性强、敏感性高。本研究从我国蛋鸡群中分离到ALV15株,分离株gp85基因核苷酸序列同源性比对显示,其中3株为ALV-A、4株为ALV-B、8株为ALV-J。分离株囊膜糖蛋白gp85基因的序列分析发现,其中ALV-A、ALV-B的遗传进化较为稳定,与原型株具有很高的同源性,但ALV-J的变异却较大。ALV-J分离株与原型株HPRS-103以及近年来的蛋鸡分离株亲缘关系均较远,但与美国早期的肉鸡分离株ADOL-Hc1、ADOL-7501,以及我国1999年~2003年间肉鸡中的分离株的亲缘关系却很近;ALV-J分离株WX-J1216和JS-J1210与我国2011年的肉鸡分离株SCAU11-H位于同一分支,表明近年来出现于我国蛋鸡群中的ALV-J可能来源于肉鸡。4株ALV-J分离株(SQ-J1211、CZ-J1212、WX-J1214、WX-J1215)与来自我国地方品系鸡中的ALV-J分离株HR332有很高的亲缘关系,说明ALV-J的感染范围扩大、对地方品系鸡也造成了很大的危害。
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