酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)(单酚或二酚,氧化还原酶,EC 1.14.18.1),是一种多功能、糖基化的黑色素细胞特异性含铜氧化酶,主要存在于一种特殊细胞器黑素体中,广泛分布于细菌、植物和哺乳动物体内。迄今为止,已有大量的证据表明TYR在与酪氨酸相关的生理过程中发挥着重要作用,如植物褐变反应、昆虫角质层硬化、氧化应激和哺乳动物黑色素的生成等等。例如,在分子氧存在的情况下,TYR催化单酚的邻位羟基化形成邻二酚,并进一步氧化邻二酚生成邻醌,促使黑色素细胞合成黑色素。已有报道表明TYR可直接影响黑色素的生成,并与白癜风、黑色素瘤等严重皮肤疾病密切相关,是白癜风、黑色素瘤等严重皮肤病的生物标志物和治疗靶点。检测TYR的传统方法主要包括比色法、高效液相色谱法、免疫检测法、分光光度法、电化学检测法等等。这些方法大都存在着样品前处理复杂、生物相容性差或者不能实时检测等缺陷。并且通过这些方法检测出来的结果差异较大,不能用于TYR的精准检测。与传统的检测方法相比,荧光检测法具有检测成本低,操作简单,选择性好,灵敏度高,并且有着良好的生物相容性,可以进行活体实时检测等优点而受到科研工作者的广泛关注。本文以3-羟基苄氨基作为TYR的识别基团,基于天然化学偶联(分子内S→N转化),设计并合成了一种能够快速检测TYR的turn-on型荧光探针W-NBD。实验结果表明该探针在PBS缓冲溶液中能够高选择性地检测TYR,解决了已经报道过的探针会受活性氧干扰的问题。使用该探针,我们成功测了多种细胞全蛋白提取液中TYR的活性。在探针W-NBD的基础上,我们又设计并合成了一种比率型的TYR荧光探针B-BODIPY,可实现TYR活性的快速、选择性检测。