猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus),是目前已知最小的动物DNA病毒。PCV可分为猪圆环病毒1型(PCV1),猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)。其中,PCV2又可细分为PCV2a,PCV2b,PCV2c,PCV2d,PCV2e和PCV2f六种亚型,近几年PCV2d与PCV2b在中国同时流行。PCV1不具有致病性,而PCV2则会引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD),该病能导致断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和繁殖障碍。PCV3可能和PDNS的临床症状相关,会导致母猪生殖障碍、仔猪心脏损伤和多系统炎症。目前,PCV2商业疫苗均为灭活疫苗,大致包括全病毒灭活疫苗、重组病毒灭活疫苗、亚单位疫苗等。嵌合型PCV1-2b弱毒疫苗能对国内流行的PCV2b和PCV2d产生交叉免疫保护,是未来预防PCVAD的一种重要的候选疫苗。1.嵌合型PCV1-2b小鼠免疫应答模型的建立以嵌合型PCV1-2b疫苗株和PCV2b分离株分别接种18只BALB/c小鼠,同时设置18只对照组小鼠,在为期6周的实验期,每周从各组随机选取3只小鼠进行扑杀。用荧光定量PCR(qPCR)技术对小鼠血清和组织器官中的病毒拷贝数进行定量;用间接免疫荧光法(IFA)法监测受试小鼠血清中的特异性抗体;分离小鼠脾淋巴细胞(SLCs)在体外培养,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测细胞上清中γ干扰素分泌细胞数(IFN-γ-SCs)和白介素-2(IL-2),IL-4和IL-10含量。结果显示,BALB/c小鼠在7 d.p.i.首次检测到病毒血症,随后持续下降。比较两个实验组小鼠组织中的病毒核酸拷贝数发现,除肝脏中PCV2b较PCV1-2b拷贝数高以外,在其他组织中,PCV2b、PCV1-2b病毒拷贝数相当;PCV1-2b免疫的小鼠能够引发特异性体液免疫应答,其诱发抗体的能力高于 PCV2b;PCV1-2b 和 PCV2b 组的 IFN-γ-SCs 在 14,21,28,35 和 42 d.p.i.均明显上调;21-28 d.p.i.PCV1-2b组的IL-2上调,而PCV2b在35 d.p.i.上调;两个毒株接种小鼠后的6周内,IL-4始终低于检测限,而IL-10始终处于较低的水平。2.嵌合型PCV1-2b弱毒疫苗在猪免疫应答的初步研究本室前期研究表明:嵌合型PCV1-2b弱毒疫苗能对国内流行的PCV2b和PCV2d产生交叉免疫保护,且1×103.5 TCID50/头的免疫剂量即能对猪起到良好的免疫保护效果。为了进一步探讨PCV1-2b在猪的免疫应答,尤其猪免疫后的体液免疫、细胞免疫水平与小鼠模型间的比较,本研究用PCV1-2b活疫苗和PCV2b活病毒分别接种5头21日龄断奶仔猪,并另设5头作为对照组,在0、7、14、21、28、35和42 d.p.i.,分别用间接免疫荧光法(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测受试猪血清中PCV2特异性抗体和白介素-2(IL-2)、IL-4和IL-10的含量;运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)对猪外周血淋巴细胞(PBMCs)中γ干扰素分泌细胞(IFN-γ-SC)进行计数。此外,受试猪的临床状况以及平均日增重也被记录;最后,还对病毒血症进行了评估。实验结果表明:PCV1-2b和PCV2b在猪血液中的复制水平相当,在28-42 d.p.i.PCV1-2b在猪产生更高水平的抗体,在28 d.p.i.,PCV1-2b组的IFN-y-SCs显著高于PCV2b组和对照组。在28和35 d.p.i.,PCV1-2b组的IL-2水平也显著高于对照组;三组之间IL-4水平未见显著差异;PCV2b组的IL-10在实验前期(0-21 d.p.i.)略有上升,PCV1-2b组和对照组的IL-10变化不明显。根据上述抗体应答、IFN-γ-SCs、IL-2等指标,BALB/c小鼠可代替猪作为嵌合型PCV1-2b疫苗株免疫应答的初步评价模型。