论文部分内容阅读
槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗菌、免疫调节等多种生物活性,是理想的抗生素替代物之一。本试验旨在从肉鸡回肠禽β-防御素(Av BD)、Toll样受体(TLR)和TLR信号通路的基因表达及回肠微生物区系方面探索槲皮素对肉鸡回肠菌群的作用及其机制,从而为替代抗生素提供理论依据。试验挑选480只体况正常且体重无明显差异的1日龄爱拔益加(AA)肉鸡,随后将其分4组,每组6重复,每重复20只鸡,预试期后按照体重相近的原则重新分为4组,对照组肉鸡用玉米-豆粕型饲粮进行饲喂,试验组肉鸡分别在对照组饲粮的基础上添加0.02%、0.04%和0.06%槲皮素进行饲喂。试验周期为6周,1周为预试期,5周为正试期。试验结果表明:(1)槲皮素对AA肉鸡生长性能的影响:与对照组相比,3水平槲皮素组AA肉鸡试验末体重、平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著差异(P>0.05)。(2)槲皮素对AA肉鸡死亡率的影响:与对照组相比,3水平槲皮素组AA肉鸡死亡率降低。(3)槲皮素对AA肉鸡回肠菌群的影响:与对照组相比,在纲水平,3水平槲皮素组梭菌纲菌群的相对丰度均降低;在目水平,0.02%和0.06%槲皮素组双歧杆菌目菌群的相对丰度均升高,而0.04%槲皮素组降低,3水平槲皮素组梭菌目菌群的相对丰度均降低;在科水平,0.02%槲皮素组双歧杆菌科菌群的相对丰度升高,但肠杆菌科、毛螺菌科、红蝽菌科和脱硫弧菌科菌群的相对丰度均降低,0.04%槲皮素组双歧杆菌科、肠杆菌科、毛螺菌科、红蝽菌科、脱硫弧菌科菌群的相对丰度均降低,0.06%槲皮素组双歧杆菌科和肠杆菌科菌群的相对丰度均升高,而毛螺菌科、红蝽菌科、脱硫弧菌科菌群的相对丰度均降低;在属水平,0.02%槲皮素组双歧杆菌属菌群的相对丰度升高,但肠杆菌属、沙门氏菌属、埃希氏菌属和葡萄球菌属菌群的相对丰度均降低,0.04%槲皮素组双歧杆菌属、肠杆菌属、沙门氏菌属、埃希氏菌属和葡萄球菌属菌群的相对丰度均降低,0.06%槲皮素组双歧杆菌属、肠杆菌属和沙门氏菌属菌群的相对丰度均升高,而埃希氏菌属和葡萄球菌属菌群的相对丰度均降低;在种水平,0.02%槲皮素组波希米亚双歧杆菌、卷曲乳杆菌、路氏乳杆菌、唾液乳杆菌、果囊乳杆菌、阴道乳杆菌、口乳杆菌、北里氏乳杆菌、约氏乳杆菌、加氏乳杆菌和敏捷乳杆菌菌群的相对丰度均升高,但肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、幽门螺旋杆菌、产气荚膜梭菌、鸟乳杆菌、母鸡乳杆菌菌群的相对丰度均降低,0.04%槲皮素组波希米亚双歧杆菌、鸟乳杆菌、路氏乳杆菌、母鸡乳杆菌、唾液乳杆菌、果囊乳杆菌、约氏乳杆菌和加氏乳杆菌菌群的相对丰度均升高,但幽门螺旋杆菌、肠炎沙门氏菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌、阴道乳杆菌、口乳杆菌、金黄色葡萄球菌、北里氏乳杆菌、产气荚膜梭菌和敏捷乳杆菌菌群的相对丰度均降低,0.06%槲皮素组波希米亚双歧杆菌、肠炎沙门氏菌、产气荚膜梭菌、卷曲乳杆菌、母鸡乳杆菌、唾液乳杆菌、果囊乳杆菌和加氏乳杆菌菌群的相对丰度均升高,而大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、幽门螺旋杆菌、鸟乳杆菌、路氏乳杆菌、阴道乳杆菌、口乳杆菌、北里氏乳杆菌、约氏乳杆菌和敏捷乳杆菌菌群的相对丰度均降低;0.02%和0.06%槲皮素组AA肉鸡回肠微生物的Shannon指数均升高。(4)槲皮素对AA肉鸡回肠Av BD表达的影响:与对照组相比,0.02%槲皮素组AA肉鸡回肠Av BD4和Av BD6 m RNA表达均显著增加(P<0.05),Av BD3和Av BD11 m RNA表达均极显著增加(P<0.01),而Av BD12和Av BD13 m RNA表达均显著降低(P<0.05);0.04%槲皮素组AA肉鸡回肠Av BD9 m RNA表达均显著增加(P<0.05),Av BD7与Av BD10 m RNA表达均极显著增加(P<0.01);0.06%槲皮素组AA肉鸡回肠Av BD5和Av BD8 m RNA表达均显著增加(P<0.05),Av BD10、Av BD11和Av BD13 m RNA表达均极显著增加(P<0.01);3水平槲皮素组Av BD1、Av BD2和Av BD14 m RNA表达均无显著差异(P>0.05);另外,0.04%和0.06%槲皮素组总Av BD在AA肉鸡回肠m RNA表达均显著增加(P<0.05,P<0.01)。(5)槲皮素对AA肉鸡回肠TLRs表达的影响:与对照组相比,0.02%槲皮素组AA肉鸡回肠TLR21 m RNA表达显著降低(P<0.05),TLR1A、TLR1B、TLR2A和TLR4 m RNA表达极显著降低(P<0.01);0.04%槲皮素组AA肉鸡回肠TLR1A、TLR1B和TLR2A m RNA表达极显著降低(P<0.01),而TLR7在AA肉鸡回肠m RNA表达有显著增加(P<0.05),TLR4在AA肉鸡回肠m RNA表达极显著增加(P<0.01);0.06%槲皮素组TLR1A、TLR1B、TLR2A和TLR3 m RNA表达极显著降低(P<0.01);3水平槲皮素组TLR2B、TLR5和TLR15 m RNA表达无显著差异(P>0.05);另外,0.02%和0.06%槲皮素组AA肉鸡回肠总TLR m RNA表达极显著降低(P<0.01)。(6)槲皮素对AA肉鸡回肠TLR信号转导通路的影响:与对照组相比,0.02%槲皮素组AA肉鸡回肠干扰素调节因子7(IRF7)m RNA表达极显著增加(P<0.01),而IκB激酶α(IKKα)、肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)、IκB激酶ε(IKKε)、NF-κB抑制剂α(IκBα)和核因子κB(NF-κB)m RNA表达均显著降低(P<0.05),IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB抑制剂β(IκBβ)、髓样分化因子88(My D88)、Toll-白细胞介素1受体域接头蛋白(TIRAP/MAL)和TANK结合激酶1(TBK1)m RNA表达均极显著降低(P<0.01);0.04%槲皮素组肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在AA肉鸡回肠m RNA表达极显著增加(P<0.01),而NF-κB和IκBαm RNA表达显著降低(P<0.05),IKKβ、IKKε、IκBβ、My D88、TIRAP/MAL和TRAF3 m RNA表达均极显著降低(P<0.01);0.06%槲皮素组AA肉鸡回肠白细胞介素1β(IL-1β)和IKKαm RNA表达均显著降低(P<0.05),My D88、TIRAP/MAL和TBK1 m RNA表达均极显著降低(P<0.01)。3水平槲皮素组干扰素α(IFN-α)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素调节因子3(IRF3)、转化生长因子β(TGFβ)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、干扰素β(IFN-β)、白细胞介素8(IL-8)、TRIF相关接头蛋白分子(TRAM)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子激酶1(TAK1)在AA肉鸡回肠m RNA表达皆无显著差异(P>0.05)。因此,适量槲皮素添加AA肉鸡饲粮中能发挥对回肠Av BD和TLR信号通路的调节作用,继而改善回肠微生物区系,从而维持回肠微生态平衡,降低死亡率。