基于高效液相色谱-质谱联用技术的HBV相关性肝纤维化血清代谢标志物筛选研究

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目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关肝纤维化和慢性乙型肝炎(CHB)患者血清代谢组的差异,寻找与HBV相关性肝纤维化相关的潜在标志物。方法:采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)分析16名HBV相关性肝纤维化和16名CHB患者血清代谢谱;应用主成分分析、变量投影重要性分析值等统计分析及数据库检索,筛选鉴定有差异的代谢物;利用Metabo Analyst 4.0软件对差异代谢物进行代谢通路富集分析,筛选出富集于主要代谢通路上的关键代谢物;利用受试者工作特征曲线(ROC)评价主要关键代谢物作为潜在标志物的诊断性能。结果:(1)共筛选并鉴定出神经鞘磷脂、1-磷酸-鞘氨醇、磷脂酰胆碱、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、尿酸、苏氨酸、乳酸、脱氧胆酸、肉桂酸、左旋肉碱(卡尼丁)、(神经)鞘氨醇、神经酰胺、酪氨酸、甘露醇等54种内源性差异代谢产物。(2)代谢通路分析和富集分析发现,神经鞘磷脂、1-磷酸-鞘氨醇、(神经)鞘氨醇、神经酰胺等4种差异代谢物主要富集于鞘脂代谢通路(-log(p)=9.747,impact=0.420),而磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰甘油等5种差异代谢物主要富集于甘油磷脂代谢通路(-log(p)=10.899,impact=0.063),磷酸乙醇胺既存在于鞘脂代谢通路,也存在于甘油磷脂代谢通路。(3)ROC分析显示,磷脂酰甘油(PG)的曲线下面积(AUC)为0.914,灵敏度87.5%,特异度93.75%,阳性预测值93.33%,阴性预测值88.24%;1-磷酸-鞘氨醇(S1P)的AUC为0.781,灵敏度75%,特异度81.25%,阳性预测值80%,阴性预测值76.47%;磷脂酰丝氨酸(PS)的AUC为0.883,灵敏度81.25%,特异度87.5%,阳性预测值86.67%,阴性预测值82.35%;磷脂酸(PA)的AUC为0.756,灵敏度68.75,特异度75%,阳性预测值73.33%,阴性预测值70.59%;神经酰胺(Ceramide)的AUC为0.82,灵敏度为93.75%,特异度75%,阳性预测值78.95%,阴性预测值为92.3%;神经鞘磷脂(SM)的AUC为0.855,灵敏度为87.5%,特异度81.25%,阳性预测值82.35%,阴性预测值为86.67%;磷脂酰胆碱(PC)的AUC为0.813,灵敏度为81.25%,特异度62.5%,阳性预测值68.42%,阴性预测值为76.92%;磷脂酰肌醇(PI)的AUC为0.879,灵敏度为87.5%,特异度87.5%,阳性预测值87.5%,阴性预测值为87.5%;(神经)鞘氨醇(Sphingosine)的AUC为0.834,灵敏度81.25%,诊断特异度81.25%,阳性预测值81.25%,阴性预测值81.25%。结论:乙肝肝纤维化患者和慢性乙肝患者两组中代谢谱存在显著差异。有9种富集于鞘脂代谢通路和甘油磷脂代谢通路的主要差异代谢产物,在乙肝纤维化的诊断中具有良好的性能,是乙肝纤维化的潜在代谢指标,可能在乙肝肝纤维化的发生发展中起着重要的作用。
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