【摘 要】
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诺丽果为巴戟属植物,其主要化学成分包括黄酮类、蒽醌类以及多糖等,诺丽果多糖是其主要活性成分,具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等广泛的生物活性。目前诺丽果多糖主要采用热水浸提法和超声波辅助水提法,提取率仅为6%～8%。闪式提取技术依靠高速剪切力和超动分子渗滤技术能够最大限度保留植物有效成分。因此,本课题采用正交设计优化闪式提取诺丽果多糖工艺,用以提高多糖的提取率,进而分离纯化诺丽果多糖并对其结构进行表征
【基金项目】
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哈尔滨商业大学青年基金17XN061；
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诺丽果为巴戟属植物,其主要化学成分包括黄酮类、蒽醌类以及多糖等,诺丽果多糖是其主要活性成分,具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等广泛的生物活性。目前诺丽果多糖主要采用热水浸提法和超声波辅助水提法,提取率仅为6%～8%。闪式提取技术依靠高速剪切力和超动分子渗滤技术能够最大限度保留植物有效成分。因此,本课题采用正交设计优化闪式提取诺丽果多糖工艺,用以提高多糖的提取率,进而分离纯化诺丽果多糖并对其结构进行表征。以期为诺丽果多糖的综合开发提供参考依据,为保健品生产厂家降低成本。本文中的诺丽果购自海南省三亚市,采用闪式提取技术提取诺丽果多糖,在单因素实验的基础上,借助正交设计得到诺丽果粗多糖的最佳提取工艺条件。利用Sevag法脱蛋白及过氧化氢脱色除杂,采用DEAE-52纤维素柱色谱及葡聚糖凝胶Sephadex G-75色谱柱分离纯化,得诺丽果均一多糖。采用高效液相色谱法、苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝法验证5种多糖组分的纯度并检测其分子量。采用苯酚-硫酸法、Molish反应、茚三酮反应、双缩脲反应、I2-KI反应和三氯化铁反应验证诺丽果均一多糖是否含有蛋白、核酸、淀粉、酚类或鞣质成分。最终采用紫外光谱、红外光谱、PMP柱前衍生法、刚果红实验、粒度分析、X射线衍射以及扫描电镜对诺丽果均一多糖NONI-C进行结构表征。借助正交设计得到闪式提取法提取诺丽果粗多糖的最佳工艺条件为:料液比1:60,提取时间50S,提取温度70℃,诺丽果粗多糖提取率达到16.08%。经纤维素和凝胶柱柱层析,最终获得5种诺丽果均一多糖,分别命名为NONI-A1、NONI-A2、NONI-B、NONI-C及NONI-D2。根据标准曲线和保留时间计算得出NONI-A1的分子量为36258Da;NONI-A2的分子量为33473 Da;NONI-B的分子量为30152 Da;NONI-C的分子量为28264 Da;NONI-D2的分子量为24572 Da。纯度检测试验说明诺丽果均一多糖不含蛋白质、核酸、淀粉、酚类或鞣质成分。选取得率最高的组分NONI-C进行深入研究,紫外结果证明NONI-C为糖类物质,且不含蛋白和核酸。红外结果提示NONI-C为α-型吡喃糖。单糖组成分析得知NONI-C由Glc A、Gal A、Glc、Gal、Xyl和一个未知糖构成。单糖间摩尔比为Gal A:Glc A:Gal:Xyl:未知糖:Glc=5.46:4.75:10.73:10.43:1.64:1。扫描电镜观察到NONI-C呈珊瑚状堆积,刚果红实验结果表明NONI-C具有三股螺旋结构。粒径检测得知NONI-C平均粒径为172.8nm。本研究首次从诺丽果中提取、分离纯化出5种诺丽果均一多糖,并采用物理和化学相结合的分析手段对得率最高的组分NONI-C进行结构初步表征。揭示了诺丽果多糖NONI-C初高级结构,为诺丽果多糖的构效关系研究提供理论基础,为诺丽果多糖的综合开发提供数据支撑。
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