论文部分内容阅读
家蚕丝腺是合成、分泌蚕丝蛋白的重要器官，具有作为生物反应器的基本特点。为了实现人类胰岛素生长因子-I(hIGF-I)在转基因家蚕细胞和丝腺组织中的表达，我们以家蚕丝胶基因启动子(Ser-1)驱动人胰岛素样生长因子(hIGF-I)，构建了带有家蚕杆状病毒极早期基因启动子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3GFP-ser-hIGF-ie-neo，在可表达转座酶的辅助质粒存在下，转染BmN培养细胞，以700～800μg/mL的G418筛选，获得了稳定转化细胞系；ELISA检测检测结果显示，5×105个细胞/ml MGF-I的表达水平约7.8×103Pg：转基因载体pigA3GFP-Ser-hIGF-ie-neo通过精子介导导入蚕卵，利用neo、gfp基因的双重筛选，经过PCR和点杂交鉴定，获得了转基因家蚕，ELISA检测结果显示，在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2.44×103 pg。此外，用家蚕丝素Fhx/P25启动子驱动hIGF-I，构建了带有ie-1启动子控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP-Fhx/P25-hIGF-ie-neo，该载体以精子介导法导入蚕卵，通过筛选并结合分子生物学鉴定，获得了转基因家蚕，ELISA检测结果显示，在G1代hIGF-I在每克后部丝腺组织中的表达水平为152×103 pg。