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近年来我国南方梨区早期异常落叶的发生普遍,造成的损失十分严重。本实验室前期对造成梨早期落叶的病原菌进行系统鉴定,证实该病系由果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)侵染所致,同时发现,该菌在田间的症状表现存在有两种类型,I型产生不扩展的黑色斑点症状,II型产生可扩展的坏死斑症状。本研究选取来源于两种不同症状类型的代表菌株FJ-85(产生黑点症状)和菌株FJ-11-2(产生坏死斑症状),比较两个菌株有性态与无性态的症状表现,并利用荧光标记和组织染色方法显微观察这两种不同致病型菌株的侵染过程,为探讨果生炭疽菌的致病机制和解析果生炭疽菌在我国梨上的致病多样性提供新的实验依据。取得的主要研究结果如下:1.两个不同致病型菌株子囊孢子单孢菌系的生物学特性及致病性研究。以梨果生刺盘孢的两种致病型菌株FJ-85(产生黑点症状)和菌株FJ-11-2(产生坏死斑症状)为材料,研究发现这两个菌株的子囊孢子单孢培养均可产生正、负两种类型的单孢菌系,正型单孢菌系菌落浅白色,其上形成的子囊孢子再培养,可形成正、负两种类型的单孢菌系。负型单孢菌系菌落深灰色,其上形成的子囊孢子再培养,只形成负型一种单孢菌系。两个菌株的单孢菌系中,负型的比例明显多于正型。两种类型的单孢菌系对峙培养,在菌落内及菌落交界处均可形成子囊壳,而同种类型的单孢菌系对峙培养仅在菌落内产生子囊壳。结果表明同种类型的单孢菌系可同宗配合,而正、负两种类型的单孢菌系还可异宗配合。正型单孢菌系的致病力与原始菌株相近,而负型单孢菌系较原始菌株弱。两个菌株的单孢菌系在翠冠梨上引起的症状差异与其原始菌株相同。2.两个不同致病型菌株GFP转化体系的建立。利用ATMT法对两个致病型菌株FJ-85和FJ-11-2进行GFP标记,选取并测定转化子的荧光稳定性和潮霉素B抗性,并通过分子方法检测转化子中的hph和gfp基因。通过比较野生型菌株和转化子的菌落形态、生长速率和和致病力,筛选出与野生型较一致的转化子FJ-85-24和FJ-11-2-39。3.两个不同致病型菌株GFP转化子对梨叶侵染的显微观察。用转化子菌株FJ-85-24和FJ-11-2-39的分生孢子悬浮液,在翠冠梨叶上无伤和针刺接种后定期进行显微观察。结果显示,接种菌株FJ-85-24后,在黑点症状部位可以看到附着胞附着在叶片表面,黑点症状周围细胞出现明显的防卫反应,但未看到明显的侵染菌丝在叶片内部的扩展,怀疑黑点症状可能是由附着胞在侵染中产生的某种次生代谢产物与寄主进行非亲和互作而引起过敏性坏死反应。而菌株FJ-11-2-39的附着胞在叶片上并未显症而是以附着胞形式潜伏侵染。在发病后期两个菌株均会在叶片角质层下形成大量子囊壳。通过两个转化子的分生孢子液无伤和针刺接种丰水梨叶后发现,症状出现明显较早,且坏死部位可以看到菌丝的扩展。荧光显微镜下观察到叶片栅栏组织与海绵组织之间的组织坏死,但并未观察到菌丝在病组织内的扩展情况。4.两个不同致病型菌株侵染梨叶的组织染色法观察。在梨叶上接种菌株FJ-85和FJ-11-2的分生孢子,观察发现二者具有相同的萌发率,但萌发后形成的附着胞数量与类型,在接种初期存在显著性差异,菌株FJ-85的附着胞数量较菌株FJ-11-2多,前者多为短芽管末端形成的附着胞,后者则多为芽管伸长形成的附着胞。但接种24h后,二者差异不明显,均可观察到在芽管末端及周围芽生分生孢子,产生大量的附着胞。