木芙蓉叶抗呼吸道合胞病毒有效部位的分离纯化及其抗病毒机制研究

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bright_123456789
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目的利用体外抗病毒示踪技术,通过不同的分离纯化方法筛选木芙蓉叶抗呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Viruses,RSV)的有效部位,在细胞生物学水平通过体外、体内实验检测木芙蓉叶抗RSV有效部位的效果,并进一步研究其抗RSV作用机制。方法1.采用水提醇沉及超滤法获得木芙蓉叶粗提物,通过体外细胞实验,观察细胞病变效应(CPE),以噻唑蓝(MTT)染色法,以治疗指数(TI)为指标确定抗RSV效果最好的超滤提取物。2.采用NKA-9、DM-301、D-101、X-5、AB-8五种不同极性的大孔吸附树脂柱,分别以蒸馏水、体积分数为25%、50%、75%的乙醇作为流动相对粗提物进一步分离纯化。同时在细胞水平进行抗病毒实验,筛选出分离效果最佳的树脂柱及洗脱剂,得到抗RSV效果最好的有效部位。3.对得到的木芙蓉叶有效部位,通过不同的时间节点加入细胞中,初步探究其体外抗病毒机制。4.建立RSV肺炎小鼠模型,将木芙蓉叶有效部位分为高、中、低三个剂量组进行药效学实验,观察各组小鼠体重变化及活动,肺指数变化情况,各用药组肺指数抑制率,肺组织病理切片,探究木芙蓉叶有效部位的体内抗病毒效果。5.通过ELISA试剂盒方法,对小鼠血液中的炎症因子白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度进行检测,探究木芙蓉叶有效部位的体内抗RSV机制。结果1.分子量在5000-10000的超滤提取物抗RSV效果最好,TI=51.8,高于利巴韦林(TI=41.11)。2.D101型大孔吸附树脂对木芙蓉叶的分离纯化效果最好,25%乙醇洗脱液第一个洗脱部位的抗RSV作用最好,TI=73.66。3.木芙蓉叶有效部位与病毒同时加入细胞TI值最大。4.体内实验表明,木芙蓉叶有效部位可改善由病毒感染引起的体重下降,肺指数升高,减轻肺组织病变。5.木芙蓉叶有效部位可升高小鼠血清中的炎症抑制因子IL-2、IFN-γ的浓度,减少炎症促进因子TNF-α含量。结论:木芙蓉叶经水提醇沉、超滤及D101型大孔吸附树脂分离纯化后,得到的有效部位具有一定的抗RSV作用。体外实验结果表明,木芙蓉叶有效部位对病毒的直接灭活作用最强。此外,体内实验结果显示其还可以升高小鼠血清中的炎症抑制因子IL-2、IFN-γ的浓度,减少炎症促进因子TNF-α含量,推测其抗病毒机制可能与免疫调节有关。
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