前言 缺血性脑血管病是常见病及多发病，是目前人类疾病的三大死亡原因之一。存活者中50％-70％病人遗留瘫痪，失语等严重后遗症。导致该病的危险因素很多。其中，吸烟作为中风的独立危险因素已进一步得到证实。然而，吸烟引起脑血栓形成的确切机制尚不清楚。 近年来，粘附分子在脑缺血及脑损伤中的作用已得到证实。许多炎性因子及粘附分子参与了脑梗死发生的急性炎症过程。其中P-选择素介导的白细胞与血管内皮细胞的“滚动”粘附，为动脉粥样硬化的形成、白细胞与内皮细胞的紧密粘附及白细胞的进一步趋化迁徙打下基础。基质金属蛋白酶(MMP)是分解细胞外基质的蛋白酶类中最主要的一类。它们与动脉粥样硬化，缺血性脑损伤关系密切。Romomic等结合运用多种方法观察大鼠MCAO后MMP-9的表达，发现其出现在缺血区及周边区的内皮细胞、中性粒细胞和巨噬细胞上，提示MMP-9表达的增加与脑缺血损伤有强相关性。 本实验通过观察不同吸烟量的大鼠脑内血管内皮细胞P-选择素和MMP-9的表达情况。从而初步探讨吸烟导致脑缺血的发病机制。 材料与方法 1．实验材料：健康Wistar大鼠60只，购于中国医科大学动物实验中心。P-选择素及MMP-9单克隆抗体、SABC试剂盒购于武汉博士德生物制品有限公司。实验用烟为市售X牌香烟。 2．实验方法：健康WIStal大鼠60只，分为6组门）正常对照组，6只（不做任何处理Xp）短期大量吸烟组，12只（每次吸烟10支，每天2次，连续吸烟 30天人间）长期大量吸烟组上 只（每次吸烟10支，每天2次，连续吸烟90天八K）长期小量吸烟组，12只（每次吸烟4支，每天二次，连续吸烟90天广O）戒烟组＊ 只（每次吸烟10支，每天2次，连续吸烟30天，戒烟30天广N＊吸烟组，6只（放人同样烟仓，不吸烟火实验结束后次日随机取脑。通过免疫组化染色观察大鼠脑血管内皮细胞P一选择素及MMP－9的表达。数据结果应用SPSSS．0软件包行SNK检验，以Pd．05为差异有显著性。 结 果 P一选择素及MMP－9阳性反应物呈棕黄色。P一选择素定位于血管内皮细胞的细胞膜。MMP－9定位于血管内皮细胞的细胞浆。正常对照组及非吸烟组P一选择素和MMP－9表达极少。余各组可见二者有不同程度表达。且与对照组比较有显著性差异K＜0．05人其中P一选择素阳性细胞多为毛细血管后微静脉的内皮细胞。MMP－9则在血管内皮细胞及血脑屏障处均有表达。 讨 论 缺血性脑血管病目前是直接威胁人民生命健康及生活质量的疾病。流行病学显示吸烟是其主要危险因素。但吸烟引起脑梗死的发病机制尚不清楚。近年来，认为脑血管张力的增加，血管壁本身的破坏特别是动脉粥样硬化的形成是脑缺血最重要最直接的原因。血管内皮细胞结构和功能损害时，其产生的粘附分子是单核 ·二·细胞聚集所必需的，后者是动脉粥样硬化形成过程的重要环节，同时内皮细胞的损伤也是脑缺血损害的早期病变的基本动因。目前报道，脑缺血的发生也被认为是炎症反应的一个过程。这个过程中粘附分子起着重要作用。 细胞粘附分子是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖蛋白。其中选择素家族中的P一选择素与脑梗死的发生联系密切。P一选择素是存在于巨核细胞和血管内皮细胞Weibel－palade ／J＼体膜上的跨膜糖蛋白，亦有部分存在于血小板。一颗粒膜上。其相对质子质量 140 X 10＼ 140KD人 P一选择素的表达是由于局部脑缺血激活了微血管的凝集系统，导致血液中的凝血酶和组胺含量增高，而使其在激活的内皮细胞表达。P一选择素引起血栓和脑损伤的机制：门）P一选择素可介导血循环中白细胞在内皮细胞上滚动，而进一步导致微血管堵塞。p冲一选择素可使白细胞穿出血管壁进人脑实质，导致缺血区脑组织损伤。O）P一选择素可增加粒细胞／内皮细胞介导的纤维素沉积，而引起血栓发生。 本实验中，可见P一选择素的主要表达在毛细血管后微静脉内皮细胞上，且长期大量吸烟组的表达最多，与其它各组比较有显著性差异。由此我们推测吸烟可使内皮细胞表面的P一选择素表达上调，并通过其介导的炎症反应而进一步致血栓形成。烟草中的大量尼古丁可致内皮细胞损害，使内皮细胞分泌合成血管活性物质。尼古丁还可刺激交感神经，引起血管收缩、缺血，进一步导致血管内皮细胞上的P一选择素表达增多。 基质金属蛋白酶是分解细胞外基质的蛋白酶中最主要的一类。1996年由Cossins等发现，它们是可以降解细胞外基质uCM）分子的锌依赖性酶，可降解基底膜的ECM成分，其中MMP－9即 92KDw型胶原酶（又称明胶酶 B）是可降解基底膜的 ECM成分的主要酶类。主要由中性粒细胞和巨噬细胞、上皮细胞等以 ·3·无活性的酶原分泌，激活此酶的蛋白酶为纤溶酶等。其主要的胶原性底物为构成基底膜的w型胶原。目前证明，内皮细胞可分泌MMP－9。本