小柴胡汤及其拆方对小鼠体内抗流感病毒作用及其机制研究

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目的流感病毒可以引起呼吸道感染,发病急、流行广泛、传播迅速,老人、小孩和慢性病患者群体感染易出现并发症,且病死率高。由于流感病毒表面抗原能连续不断地发生抗原性漂移和转换,使本来有效的疫苗很快失效,使得流感不断流行,对人民群众的身体健康造成极大威胁。流感病毒引发的呼吸道感染属于中医时行感冒和风温的范畴。《伤寒论》中的名方小柴胡汤为和解少阳的代表方。方中以苦辛微寒之柴胡为君,清疏少阳半表之邪,以苦寒之黄芩为臣,清泻少阳半里之邪,二药相配共奏和解少阳之功。佐以半夏,生姜和胃降逆止呕;人参,大枣益气健脾;炙甘草助参、枣扶正,且调和诸药为使。全方寒热并用,攻补兼施,升降协调,有和解少阳,疏利三焦,调达气机,宣通内外,运转枢机的作用。药仅七味而配伍精当,组方严谨,疗效显著,安全可靠。研究小柴胡汤调节免疫机制抗病毒感染的机制,以及各配伍组间的协同作用机理,对于揭示经方配伍治疗的科学性和严谨性,弘扬祖国传统医药学,发掘祖国传统医药学宝库,指导临床治疗,都具有重要的意义。方法本实验通过模拟人类呼吸道病毒感染,复制出呼吸道病毒感染的实验小鼠模型,将其分为不同组别,以病毒唑作为西药对照组,通过小柴胡汤全方及柴芩,姜夏,参枣草,柴芩+姜夏,柴芩+参枣草等各拆方的治疗,运用免疫学等现代生物科学的先进技术方法,观察小柴胡汤及其拆方的作用机制,探求小柴胡汤“扶正祛邪”与“和法”的本质,寻求配伍的基本规律。具体方法如下:1、通过两次病毒的鼠肺适应过程,再经鸡胚尿囊腔接种传代,制备新鲜毒种。2、测定小鼠体内病毒滴度,得到病毒的LD50,以备小鼠体内实验时使用。3、将小鼠分为9组,经造模和治疗后,用精密电子秤称量小鼠体重及肺重,计算肺指数及肺指数抑制率,来观察小柴胡汤及其拆方对流感病毒感染小鼠的保护作用。4、将小鼠分为9组,经造模和治疗后,眼球采血,取血清,运用双抗体夹心ELISA法测定各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-2(IL-2)的表达水平,观察小柴胡汤及其拆方对流感病毒感染小鼠免疫功能的调节。结果1、小柴胡汤全方组,柴芩组,柴芩+姜夏组及柴芩+参枣草组的肺指数与空白对照组比较P<0.05,表明小柴胡汤及含有柴胡,黄芩的各拆方能降低流感病毒感染小鼠的肺指数,表明小柴胡汤及其拆方对流感病毒感染小鼠均有保护作用,且以全方组为最佳。2、比较不同处理组间的TNF-α的浓度可知:空白对照组明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01),提示甲1型流感病毒感染后小鼠体内TNF-α释放增多,可能对机体造成炎性损伤;小柴胡汤全方组,柴芩+参枣草组和参枣草组小鼠血清TNF-α低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示各组可以降低小鼠血清中由于流感病毒感染而升高的TNF-α含量,从而可能减轻炎症反应;病毒唑组,柴芩组,柴芩+姜夏组和姜夏组小鼠血清TNF-α也有下降,但和模型组比较差异无统计学意义。3、比较不同处理组间的IL-2的浓度可知:空白对照组小鼠血清IL-2低于正常组,差异有统计学意义(P<0.01),提示甲1型流感病毒可以导致IL-2明显降低,小鼠免疫功能明显受到影响;病毒唑组高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);小柴胡汤组,柴芩组,柴芩+姜夏组,柴芩+参枣草组小鼠血清IL-2明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01),提示各组对小鼠因流感病毒感染而下降的免疫功能有明显的提高作用;参枣草组和姜夏组小鼠血清IL-2也有升高,但和模型组比较差异无统计学意义。结论拆方研究是目前应用于中药复方组方理论研究的最为常用的方法,运用此研究方式能深入了解中药复方配伍的规律。综合本实验结果,小柴胡汤具有明显的抗流感病毒作用,且能有效防止过激的炎症反应对机体造成的免疫性损伤,其作用优于各拆方;在小柴胡汤方剂中,以柴芩配伍的各组复方抗流感病毒的作用最强,表明在该方剂中,主成分柴胡,黄芩在抗流感病毒感染环节中可能起着主要的作用,而人参、大枣、甘草则可能主要起到提高机体免疫力的作用。为小柴胡汤的临床应用和进一步研究提供了一定的实验依据。
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