本研究筛选获得了3株产普鲁兰酶的微生物菌株,分别为Bacillus licheniformis、 Bacillus cereus、Bacillus subtilis。同时通过简并引物和特异性引物克隆得到了这3株芽孢杆菌属菌株的普鲁兰酶基因,普鲁兰酶基因大小分别为2133bp、2142bp、2157bp,分别编码711、714、719个氨基酸,同源性比对发现获得的普鲁兰酶基因与NCBI数据库中最高相似性都为98%及以上。将这3个普鲁兰酶基因分别连接到pET28a/pET32a/pET42a载体中,并转化到表达宿主BL21, SDS-PAGE电泳分析,这3个普鲁兰酶基因在大肠杆菌中均成功获得了表达,表达的蛋白分子量大小约为80KDa。对所构建的重组菌株的酶学性质检测,发现来源于Bacillus licheniformis的普鲁兰酶基因在Escherichia coli表达载体pET42a中测得的酶活最高,为4.48U/ml,且该酶的最适反应温度是40℃,最适作用pH是7.0,且为Ⅰ型普鲁兰酶；来源于Bacillus cereus和Bacillus subtilis的普鲁兰酶的最适反应温度分别为40℃和30℃,最适pH都为6.0。另一方面,本研究以pBE2a为基础质粒构建了Escherichia coli-Bacillus subtilis穿梭胞内表达载体pBNS1和分泌表达载体pBNS2,这两个表达载体都受p43强启动子的控制。pBNS1不含信号肽可用于胞内表达,pBNS2在p43启动子的下游依次添加了amyQ信号’肽、多个克隆位点和His-Tag标签,可用于分泌表达及蛋白纯化。利用gfp基因作为报道基因来检测所构建的两个载体的表达效率,荧光检测发现这两个载体在E.coli BL21和Bacillus subtilis1A751中均成功的表达了绿色荧光蛋白；SDS-PAGE电泳分析,表达的目的蛋白条带大小约为30KDa,且在Bacillus subtilis1A751中pBNSl质粒在没有信号肽的条件下也对gfp基因实现了高效分泌表达。