聚丙烯酸烷基酯的制备及佐剂性能研究

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聚丙烯酸烷基酯生物相容性好、制备成本低,在药用辅料等领域有广阔的应用前景。目前主要通过乳液聚合、本体聚合和溶液聚合等方法制备,但聚合过程中存在后处理工艺复杂、体系热量不易控制等缺点。因此,本论文采用体系粘度小、聚合过程易控制的沉淀聚合法制备聚丙烯酸烷基酯,并研究其对卵清蛋白(OVA)的佐剂性能。同时,将聚丙烯酸烷基酯与纳米乳液混合制备聚丙烯酸烷基酯纳米油乳(PNE)佐剂,以商品化Montanide Gel 01佐剂作为对照组,制备OVA疫苗,进行免疫效果及作用机理评估。主要工作如下:(1)以丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸十八烷基酯(SMA)为反应单体,季戊四醇三烯丙基醚(APE)为交联剂、偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,制备聚丙烯酸烷基酯。采用核磁共振氢谱(~1H NMR)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和电子扫描显微镜(SEM)进行表征。研究反应时间、Span-60含量、AIBN含量对聚丙烯酸烷基酯产率、水凝胶透光率及剪切粘度的影响。基于APE含量、SMA含量对聚丙烯酸烷基酯水凝胶剪切粘度和安全性的影响,确定最佳配方:反应时间为4 h,Span-60为0.6 wt%,AIBN为0.5 wt%,APE为1.4 wt%。此外,SMA用量需通过体内免疫实验确定。(2)将不同SMA含量的聚丙烯酸烷基酯分别配制成0.5 wt%水凝胶,与OVA制备成OVA疫苗,对BALB/c小鼠进行免疫实验。通过检测小鼠的体重及血清Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体滴度,进行安全性和有效性评估。结果表明,聚丙烯酸烷基酯具有良好的生物安全性,SMA含量为1 wt%的聚丙烯酸烷基酯在OVA疫苗中诱导机体产生最佳的血清抗体滴度。聚丙烯酸烷基酯的加入增强了免疫机体Th1型细胞免疫应答作用。通过Ig G2a/Ig G1分析可知,聚丙烯酸烷基酯诱导机体产生高效的Th2型体液免疫应答和Th1型细胞免疫应答。(3)为了避免含疏水长链的聚丙烯酸烷基酯在含盐体系中分子链的卷曲,将SMA含量为1 wt%的聚丙烯酸烷基酯与纳米乳液混合制备PNE佐剂。将PNE佐剂与商品化的Montanide Gel 01佐剂分别制备OVA疫苗,并对BALB/c小鼠进行免疫实验。通过检测小鼠的体重及血清Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体滴度,进行安全性及有效性评估。结果表明,PNE佐剂不会对免疫机体产生副作用,高效诱导机体产生Th2型体液免疫应答,同时诱导机体产生Th1型细胞免疫应答,且诱导机体产生免疫抗体的能力与进口Montanide Gel 01相当。该佐剂的制备有望用于兽用疫苗的研制。
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