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本实验从紫花苜蓿中克隆核因子Y家族基因MsNF-YB3,并对该基因DNA和编码蛋白的氨基酸序列进行了分析。通过农杆菌转化将MsNF-YB3导入烟草和紫花苜蓿中过量表达,提高了转基因植物的抗盐性。具体研究结果如下：1.成功从紫花苜蓿中克隆了MsNF-YB3基因,该基因包含一个516bp的开放阅读框(ORF),编码171个氨基酸。经BLAST发现其氨基酸序列与截叶苜蓿中NF-YB3基因的同源性为100%。MsNF-YB3与已报道的其他来源的YB3在氨基酸水平的进化关系分析表明这是一个典型的植物NF-YB家族成员,包含了DNA结合域、NF-YA结合域和NF-YC结合域等保守结构域。2.本实验构建了植物转化载体pCBC-MsNFYB3,利用农杆菌介导的方式导入烟草中进行表达,通过PCR、RT-PCR和bar基因金标免疫试纸条检测确定出8个转基因烟草株系。抗盐鉴定结果表明：MsNF-YB3基因的表达提高了转基因烟草对盐胁迫的抗性。2号、6号的To代转基因株系在含有1.0%NaCl的培养基上的生长情况比对照好,可正常生根。对照组在0.6%的NaCl条件下,其生长已受到抑制。将三个株系T1代植株的叶盘在2M的NaCl中处理3天后,叶片的失水、失绿现象明显低于野生型;用100mM的NaCl浇灌6天后,转基因植株的丙二醛含量普遍低于对照组,而脯氨酸含量则高于对照组；用30%H2O2处理3天后,转基因植株的叶盘保持绿色,而非转基因和植株的叶盘则变黄,3%H202处理36小时,转基因植株的丙二醛含量普遍低于对照组,而脯氨酸含量高于对照组。这些结果表明Ms NF-YB3的表达有效提高了转基因烟草的抗盐性。3.将MsNF-YB3基因导回紫花苜蓿中,经PCR、RT-PCR和bar基因金标免疫试纸条检测,获得了11个转基因紫花苜蓿株系。将A3、A8、A15号株系及野生型紫花苜蓿叶盘在2M NaCl中处理3天,其失水、失绿情况比对照组轻；在含有150mM NaCl的培养基上,非转基因苜蓿植株生长停滞,叶片失绿,而转基因苜蓿植株仍能正常生长；在100mM NaCl浇灌6天后,转基因植株的丙二醛含量、脯氨酸含量指标强于对照组；在30%H2O2处理3天后,非转基因植株的叶盘变黄而转基因的损伤小；3%H2O2处理36小时,转基因植株的丙二醛含量普遍低于对照组,而脯氨酸含量高于对照组。上述结果表明,该基因的表达提高了转基因苜蓿植株的抗盐能力。由此我们得出结论：MsNF-YB3在紫花苜蓿抗盐中起到重要作用。