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中草药青蒿(ArtemisiaannuaL.),是我国独有的抗疟药用植物资源。马铃薯丛枝植原体(Potatowitches-broomphytoplasma,PWB),为我国出入境有害生物检疫对象。在出入境检验检疫中,应对这两种生物进行严格检疫。
本研究分别根据蒿属植物rDNAITS序列及植原体16SrDNA序列多态性设计特异性TaqMan探针及引物,通过实时荧光PCR方法对黄花蒿及马铃薯丛枝植原体进行检测,取得了以下研究进展。
1.本文对9种蒿属植物的ITS序列和13种植原体的16SrDNA序列进行了测定及比对,分别根据特异性位点设计探针—引物组,对A.annua及PWB进行实时荧光PCR检测。两组试验结果表明,两组探针—引物分别对黄花蒿和马铃薯丛枝植原体有很强的特异性,除黄花蒿和马铃薯丛枝植原体外,作为对照的其余8种蒿属材料和19种病原物均未检测到荧光信号。
2.对实时荧光PCR检测体系的优化试验结果表明,检测效果在镁离子浓度为3mM,探针浓度为0.5μM,引物浓度为0.4μM时为最佳。
3.通过对不同浓度马铃薯丛枝植原体质粒的实时荧光PCR和常规PCR扩增,发现实时荧光PCR检测灵敏度比常规PCR高约100倍,能很好地避免假阴性结果。本研究在国内首次建立了对中草药青蒿和马铃薯丛枝植原体的TaqMan实时荧光PCR检测体系,并获得很好的检测结果。该方法快速、灵敏、特异、安全,为农业生产部门及检疫部门提供了有力的技术支持和科学保障。