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目的:探讨临床验效的补肾方与成骨性基因Runx2、Osterix、OCNmRNA表达的关系,并通过比较补肾方及其养阴组分、温阳组分对上述基因表达的差异,筛选出更切之有效的中药组分。
方法:体外培养1日龄SD大鼠颅盖骨分离的成骨细胞,培养期间应用倒置相差显微镜活体观察以及矿化结节染色观察成骨细胞生物学特性,并应用含药血清方法和RT-PCR技术观察补肾方、养阴组分、温阳组分干预48h、96h对成骨细胞成骨性基因Runx2、Osterix、OCNmRNA表达的影响,同时设萌格旺组、生理盐水组。
以静置贴壁法培养的原代骨髓基质干细胞为研究对象,采用含药血清+经典成骨诱导方法和RT-PCR技术观察补肾方、养阴组分、温阳组分干预96h对骨髓基质干细胞成骨性基因Runx2、Osterix、OCNmRNA表达的影响,同时设萌格旺组、生理盐水组。
结果:
对成骨细胞,1)①在干预48h这一时点,补肾方、养阴组分、温阳组分与生理盐水、萌格旺比较,促进成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),萌格旺促进成骨细胞增殖优于生理盐水(P<0.01)。②在干预96h这一时点,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.01)。③在干预整个时间段内,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。2)①在干预48h这一时点,温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进Runx2mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。②在干预96h这一时点,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进Runx2mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。③在干预整个时间段内,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进Runx2mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);3)①在干预48h这一时点,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进OsterixmRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。②在干预96h这一时点,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进OsterixmRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。③在干预整个时间段内,补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进OsterixmRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。4)在48h、96h时点及干预整个时间段内,各组与生理盐水比较,不能促进OCNmRNA表达,无统计学差异(P>0.05)。
对骨髓基质干细胞,1)补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进骨髓基质干细胞Runx2mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01);萌格旺促进骨髓基质干细胞Runx2mRNA表达优于补肾方、温阳组分,差异有统计学意义(P<0.05)。2)补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进骨髓基质干细胞OsxmRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01);养阴组分、萌格旺与补肾方、温阳组分比较,促进骨髓基质干细胞OsxmRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05)。3)补肾方、养阴组分、温阳组分、萌格旺与生理盐水比较,促进骨髓基质干细胞OCNmRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论:
1补肾方、养阴组分、温阳组分都能促进成骨细胞增殖。
2补肾方、养阴组分、温阳组分能够上调成骨细胞与骨髓基质干细胞Runx2mRNA表达。在上调成骨细胞Runx2mRNA表达方面,温阳组分可能更有优势。而在上调骨髓基质干细胞Runx2mRNA表达方面,养阴组分可能更有优势。
3补肾方、养阴组分、温阳组分上调成骨细胞与骨髓基质干细胞OsxmRNA的表达,养阴组分可能更有优势。
4补肾方、养阴组分、温阳组分促进骨髓基质干细胞OCNmRNA的表达。
5成骨性基因Runx2、Osx可能是补肾方发挥作用的靶点。养阴组分可能在防治骨质疏松症中发挥主要作用。