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研究表明,毛细胞的再生过程实际上是其内耳胚胎发育过程的重演,而一些参与调节正常内耳发育过程的因素在毛细胞再生过程中同样起着重要作用。大鼠在很多方面更接近于人类,但是目前研究大鼠很少,由于近期克隆大鼠已突破技术限制而使大鼠再次成为啮齿类研究动物首选,因此研究大鼠耳蜗发育过程特点及其调节因素的作用将对探索哺乳类内耳毛细胞再生具有重要意义。 survivin通过抑制凋亡关键蛋白caspase-3、7的水解作用而抑制凋亡发生,特异表达于细胞周期G2/M期,参与组织的生长分化;在胚胎组织中广泛表达,在成熟终末分化组织中几乎不表达。caspase-3是导致细胞凋亡的caspase蛋白级联反应通路上的关键蛋白,可能是凋亡事件的最后执行者之一。其以酶原形式存在,一经激活能够通过级联反应自身放大、水解结构蛋白导致细胞凋亡,与凋亡的某些特征性标志有着直接关系。 本实验通过HE染色观察Wistar大鼠耳蜗形态发育过程,并且通过ABR检测、耳蜗铺片观察磷霉素钠拮抗顺铂耳毒性作用,应用免疫组化技术从蛋白水平、RT-PCR及原位杂交技术从mRNA水平定性、定位并定量检测survivin与caspase-3在耳蜗的表达规律,初步探讨两者在耳蜗发育过程中以及磷霉素钠保护顺铂耳毒性的作用机制。结果显示,胚胎期第13-14天为听泡上皮增殖期,第15-16天为感觉上皮分化期,第17天到出生后14天为耳蜗发育成熟期;出生前耳蜗已形成大体形态结构,出生后第14天已发育形成与成年耳蜗基本相同的形态结构;耳蜗精细结构的发育占整个发育时期的2/3;通过survivin抑制caspase-3调控细胞凋亡以作为调控细胞增殖的补充而参与器官形态结构的形成,并且顺铂耳毒性和磷霉素钠保护是通过survivin抑制caspase-3调控细胞凋亡而发挥作用。 本实验首次系统观察Wistar大鼠耳蜗形态发育全过程,发现在耳蜗发育过程中机体通过调控凋亡以补充对细胞增殖进行调控而参与形成精细结构;首次研究survivin在耳蜗中的表达,初步探讨其与caspase-3共同调控细胞凋亡、参与耳蜗形态发育以及顺铂耳毒性和磷霉素钠保护作用。