核酸疫苗和基因治疗作为新一代的治疗方法显示出了广阔的前景。它们都是利用基因重组技术,将外源基因构建到合适的表达载体中,从而得到具有预防或治疗能力的重组质粒。常用的载体有病毒载体和质粒DNA载体,其中病毒载体可能存在安全性的隐患,因此不能作为核酸疫苗和基因治疗的常用载体。制备药用级质粒DNA疫苗的关键环节有菌体培养、菌体裂解、粗提分离、柱层析、产品检定等。本研究通过优化培养条件及纯化工艺的改良获得HIV-GAG药用级质粒DNA疫苗。纯化工艺上,采用中空纤维超滤浓缩、离子交换介质和复合模式凝胶过滤介质提高纯化效率。通过对重组E.coli DH5a在PDM培养基和基础培养基中培养条件的研究,得知重组大肠杆菌DH5a在PDM培养基中通过42℃变温诱导的方式获得质粒DNA浓度最高。每200g细菌细胞中HIV-GAG质粒DNA的产量可达80mg。制备的HIV-GAG DNA疫苗经质量鉴定后其内毒素含量低于10EU/mg,琼脂糖凝胶电泳方法检测表明无RNA残留,无菌试验合格,pH值均符合《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》。实验结果表明,最终的产品基本符合药用级的质粒DNA要求。HIV-GAG DNA疫苗生产工艺适用于该疫苗的规模化生产。