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大肠杆菌病为危害多种家畜和家禽的一类重要的传染病,给畜牧业生产造成严重的经济损失。临床中多采用抗生素来预防和治疗大肠杆菌病,增加了生产成本,同时造成抗生素的残留和耐药性菌株的出现。研究新型的大肠杆菌的防治方法,不但可以减少抗生素的使用,降低生产成本,减轻对动物体的危害;而且可以降低药物残留,有利于人类健康和生态环境的和谐发展。生物界中存在裂解大肠杆菌的噬菌体,为治疗大肠杆菌病提供一种新的途径,因此,本试验将具有重要的临床应用价值,有利于养殖领域减排增效,符合健康养殖理念。本试验以大肠杆菌K12为宿主菌,利用双层琼脂平板法在哈尔滨市附近奶牛养殖场成功分离两株大肠杆菌噬菌体Hab-EA与Hab-EB。经过扩增培养后,两株噬菌体效价均可达到1010pfu/mL左右。电子透射显微镜观察,发现:Hab-EA属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科;Hab-EB属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科。采用双层琼脂平板法对65株大肠杆菌进行裂解试验,测定两株噬菌体的裂解菌谱,噬菌体Hab-EA与Hab-EB裂解比例分别为15/65和11/65。选择具有较广裂解谱的噬菌体Hab-EA作为研究对象,采用双层琼脂平板法与等梯度稀释法,体外评价其生物学特性,包括测定一步生长曲线、酸碱度、温度耐受性,实验结果表明:噬菌体Hab-EA对pH耐受范围为5.0-10.0,对高温不具有耐受性;Hab-EA对环境的潜伏期大约40min左右,经过80min左右的侵入增殖,效价滴度增加4个数量级。对噬菌体Hab-EA进行全基因组测序,并对编码的多种蛋白进行功能预测分析,Lys-EA在基因结构上的位置为第78个ORF序列,从39403bp到39900bp,总长498bp,共编码166个氨基酸;同时,结果表明Hab-EA为rV5噬菌体属。另外,以两株致病性大肠杆菌作为攻毒菌株同噬菌体Hab-EA同时对小鼠进行腹腔注射,结果显示噬菌体Hab-EA对感染小鼠具有一定的治疗效果。模拟污水净化系统,以天数为单位,一周内每天检测净化系统中大肠杆菌滴度,7d后大肠杆菌滴度下降4个数量级。利用核酸数据库分析裂解酶核酸序列,设计裂解酶的简并引物与表达引物。以噬菌体Hab-EA基因组做模板,体外扩增噬菌体Hab-EA裂解酶Lys-EA的核酸序列。采用原核表达系统,表达大小为25KD的重组裂解酶蛋白rHis-Lys-EA。通过对17株致病性大肠杆菌的裂解试验,分析重组裂解酶的体外裂解效果,实验结果表明rHis-Lys-EA作用某些特定致病性大肠杆菌菌株20h具有较好的裂解效果。