论文部分内容阅读
目的IgA肾病(1gA nephrophathy, 1gAN)是我国常见的肾小球肾炎之一,本实验采用分子生物及分子免疫病理等技术对50例IgA肾病患者肾组织和外周血中黏附分子CD146 (Melanoma adhesion molecule,黑色素瘤黏附分子)进行检测,阐明CD146在IgA肾病肾组织及外周血中表达的分子特征及它与IgA肾病之间的相互关系,并通过其与肾组织及临床、实验室指标进行相关性分析,初步探讨CD146在IgA肾病发生发展中的作用,进一步为IgA肾病的诊治及预后提供有力依据。方法选择在2008年11月至2010年3月期间就诊于济南军区总医院肾内科,并通过肾活检(光镜、免疫荧光、电镜)和临床资料确诊的IgA肾病患者50例,其中男性32例,女性18例,平均年龄32.32±9.12岁,平均病程18.82±30.26个月。所有患者均排除系统性红斑狼疮、乙肝相关性肾炎、紫癜性肾炎及肿瘤等所致的继发性IgA肾病。并根据WHO 1982年病理分级标准分为Ⅴ级。正常对照组33例,均为我院健康查体者,男性16例,女性17例,平均38.42±18.14岁,其中8例为肾移植术前健康供肾者。观察并记录IgA肾病组患者肾活检术前各临床指标：收缩压(127.40±20.90)、舒张压(84.64±15.87)、血红蛋白(142.24±22.48)、24小时尿蛋白定量(1.10±1.61)、血清白蛋白(39.99±6.99)、胆固醇(5.29±2.11)、甘油三酯(2.53±1.61)免疫球蛋白A(2.63±0.83)、肌酐(89.68±39.53)、尿素氮(5.34±1.27)血尿酸(363.43±102.79)等,并用简化MDRD公式估测患者的肾小球率过滤(GFR)IgA肾病组及正常对照组肾活检组织进行常规苏木素-伊红(HE)、高碘酸-席夫氏(PAS)、六胺银(PASM)、MASSON三色染色及IgA、IgG、IgM、C3、C1q、FRA、HBsAg、HBcAg等免疫荧光方法检测,并同步采用2种免疫荧光标记：四甲基罗丹明(TRITC)标记和异硫氰荧光素(FITC)标记的间接免疫荧光法观察CD146在IgA肾病肾组织中的表达情况,同时参照Katafuchi积分标准(1998)对小球及小管间质损害进行半定量评分。外周血采用流式细胞仪检测CD146的表达水平。采用SPSS13.0统计软件对资料进行统计学处理、分析,检测结果以x表示,P<0.05为差异有统计学意义。结果1、CD146在正常对照组未见表达或仅微弱表达于系膜细胞(图11A)；而在50例IgA肾病组患者肾小球和肾小管中44例呈现高表达,其阳性表达率明显高于正常对照组(χ2=9.906,P<0.01),两者间差异具有显著统计学意义；其中肾小球系膜区表达14例,强度分别为1级(+)8例,2级(++)4例,3级(+++)2例；肾小球系膜区和毛细血管襻表达9例,强度分别为1级(+)5例,2级(++)3例,3级(+++)1例；系膜区、毛细血管襻和肾小管上皮细胞表达15例,强度分别为1级(+)8例,2级(++)4例,3级(+++)3例；另有6例仅表达于肾小管上皮细胞和肾间质小动脉壁(见附图9)。CD146在IgA肾病肾组织的表达强度与IgA在肾组织的表达强度密切相关(r=0.638,p<0.05)。(图11)2、IgA肾病组外周血CD146的,表达水平明显高于正常对照组(6.39±3.25% vs 2.24±1.01%),两组间差异有统计学意义(P<0.01)(图4、5)；IgA肾病患者外周血CD146表达水平与IgA肾病病理分级呈现显著正相关(r=0.492,p<0.05)(图3)。3、在免疫荧光显微镜下,四甲基罗丹明(TRITC)标记的CD146显示的红色荧光(波长488nm)和异硫氰荧光素(FITC)标记的CD146显示的绿色荧光(波长476nm)在IgA肾病患者肾组织的表达部位一致。(图12)4、通过对IgA肾病患者外周血CD146表达与临床病理资料的相关性分析发现,CD146的表达与收缩压、舒张压、血尿酸、24小时尿蛋白定量、血肌酐、胆固醇之间存在明显正相关(p<0.05)；与IgA肾病肾组织系膜增殖、肾小球硬化、新月体形成、炎细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化呈明显正相关(p<0.05)。(见表6)结论1、CD146在IgA肾病患者肾组织呈不同程度高表达,并与IgA在肾组织中的表达强度及部位基本一致,提示CD146可能在IgA肾病的发病及病理进展中发挥重要作用。2、IgA肾病患者外周血CD146的表达水平明显高于正常对照组,并且与IgA肾病病理分级呈现显著正相关。3、外周血CD146与24小时尿蛋白定量、血肌酐、收缩压、舒张压、血尿酸、胆固醇等临床指标呈正相关,与IgA肾病肾组织系膜增殖、肾小球硬化、新月体形成、炎细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化程度呈明显正相关,提示CD146可作为反映IgA肾病肾脏受累程度的指标,同时参与了肾小球硬化和肾间质纤维化的发生发展过程,并与IgA肾病预后密切相关。