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叶酸（folates）与肿瘤的关系已受到研究者们广泛关注。目前就叶酸与结直肠癌、乳腺癌、子宫颈癌等关系进行了广泛而深入的研究；而与食管癌（esophageal cancer，EC）关系的研究较少。四川盐亭是我国食管癌高发区之一，2000年食管癌发病率为88／10万，其死亡率一直位居当地恶性肿瘤之首；1998—2005年盐亭县林农乡一直为食管癌高发区，发病率为126.85／10万。叶酸缺乏可能是其危险因素之一。国内尚无直接研究叶酸与食管癌关系的资料，食管癌患者的血清叶酸流行病学资料尚属空白。血清叶酸是评价机体叶酸营养状况的常用指标之一。叶酸的血清流行病学研究可作为探讨叶酸与食管癌关系的重要方法。因此，建立能准确测定血清叶酸的方法是研究叶酸与食管癌关系的基础和前提。本课题拟对微生物法进行改进，建立能准确测定血清叶酸的微生物法（microbiological assay，MA），并将其应用于叶酸血清流行病学中，初步探讨叶酸与盐亭食管癌的关系，为防治食管癌提供科学依据。全文从以下两个方面进行研究：1．血清叶酸微生物测定方法改进本文在Newman和Horne等对微生物法采用96孔酶标板和甘油冷冻保存干酪乳酸杆菌（L.casei）技术的改良基础上，作了两方面改进：①选择最佳菌液浓度、培养时间，确立了以一次方程线性曲线为工作曲线，提高了方法的精密度（RSD5.6％），改变了过去以对数曲线为工作曲线、精密度差（RSD15％）的情况。②探讨表面活性剂吐温-80（Tween-80）对L.casei生长及定量分析的影响，将线性范围增宽了2倍(由4.4×10-12～53×10-12g增宽为7.5×10-12～150×10-12g)。经改进后，本文选择的最佳实验条件为：稀释40倍的菌液（1.3×107cfu／ml），含0.24％（w／v）Tween-80的叶酸测试培养基，在37℃下厌氧培养L.Casei 22h。在此条件下，菌液浊度（A值）与叶酸浓度的线性相关系数为0.9997，线性范围为0.05～1.00μg／L(7.5×10-12～150×10-12g)，回收率为105.4％～112.7％，日内和日间精密度（n=7）分别为5.6％和3.3％，最低检出浓度为0.03μg／L。本改进方法测定的正常人和大鼠血清叶酸水平（11.7±4.7μg／L、58.6±11.0μg／L）均在文献报道的正常血清叶酸均值范围内。因此本改进方法用于测定血清叶酸是可行的，可用于盐亭食管癌病人血清叶酸水平的病例-对照研究。2．盐亭食管癌病人血清叶酸水平的病例-对照研究采集盐亭食管癌病人和正常对照人群的血清，并用改进的微生物法测定叶酸，采用病例-对照研究（case-control study）探讨盐亭居民血清叶酸与食管癌关系。配对比较结果显示食管癌病例组血清叶酸水平（6.4±3.7μg／L）显著低于正常对照组（8.0±5.6μg／L，P＜0.05），表明血清叶酸水平与盐亭食管癌存在一定相关性，血清叶酸水平偏低可能是盐亭食管癌发生的危险因素之一。本文采用改进的微生物法测定食管癌病人血清叶酸水平，初步探讨了血清叶酸水平与盐亭食管癌的关系，为防治食管癌提供科学依据。