抑制PLC-γ1能促进人骨性关节炎软骨细胞外基质的合成

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目的:旨在探讨磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1)在人骨性关节炎(osteoarthritis,OA)疾病发展过程中的作用。方法:本研究通过从手术废弃材料中获得正常膝关节及骨关节炎患者软骨,分离出软骨细胞,并进行细胞培养,应用蛋白免疫印迹(western blotting)技术,检测正常与OA软骨细胞中plc-γ1、磷酸化plcγ1及其下游分子(sox-9、mmp13)的差异;免疫组化方法检测plcγ1在OA与正常对照组之间表达差异;加入U73122(plcγ1抑制剂),检测下游分子(sox-9mmp13Agg Col II)表达变化;设计并合成针对plcγ1的siRNA序列,转染人OA软骨细胞,干扰plcγ1的表达;最后使用DAG和IP3相应的抑制剂处理细胞,用western blotting技术检测这些信号通路蛋白的表达水平。结果:plcγ1在骨性关节炎患者的软骨组织及软骨细胞中的表达高于相应的正常对照组。Plcγ1与OA患者软骨细胞外基质合成密切相关,进一步应用U73122(plcγ1抑制剂)或者siRNA技术降低plcγ1,均能促进OA患者软骨细胞外基质的合成;并且在调节基质合成中,plcγ1下游的IP3/Ca2+/CamK信号轴强于DAG/PKCδ轴,其可通过激活mTOR/P70S6K/S6,进而参与软骨细胞外基质的合成。结论:plcγ1参与了OA患者软骨细胞外基质的合成,而且plcγ1水平的降低能够促进软骨细胞外基质合成,plcγ1可以成为骨关节炎的一种新的治疗靶点。
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