危险病原在全球的流行,严重威胁人民生命安全、给经济财产带来了极大的损失。尽管近年来国家在疾病预防和诊断技术上投入逐步加大,但是许多疾病的诊断和治疗还是繁琐和昂贵,有些疾病在症状不明显的早期还缺乏有效诊断方法。本研究以危险病原中的病毒为研究对象,构建针对病毒检测的现场检测技术,简单快速,高灵敏,高通量。酿酒酵母Sup35朊蛋白能够自组装行成结构高度有序的纳米线,纳米线具有比表面积大和物化稳定性良好等特性,形成的天然纳米材料应用广泛,可用于高密度展示特定功能的分子,提高检测灵敏度,缩短检测时间。乙酰化修饰作为一种重要的蛋白质翻译后修饰,广泛参与生理代谢过程。大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶可被乙酰化修饰,磷酸吡哆醇氧化酶氧化底物成磷酸吡哆醛（pyridoxal phosphate,PLP）。PLP作为100多种细胞内酶的辅助因子,参与细胞的各项生命活动,对细胞至关重要。磷酸吡哆醇氧化酶活性影响PLP的合成。本研究在体外对磷酸吡哆醇氧化酶进行乙酰化修饰,研究乙酰化修饰对磷酸吡哆醇氧化酶催化活性的影响。一、基于蛋白纳米线的3D免疫探针现场检测方法的构建。将朊蛋白和病毒抗原表位蛋白融合表达,利用朊蛋白自组装的特性并借助磁颗粒在磁场下快速分离的特性,利用种子事件将抗原表位蛋白通过纳米线多价展示在磁颗粒上,形成3D免疫复合物即3D免疫探针,将其发展成为新型生物传感器,丰富高效捕获抗原免疫分子的方法,提高病毒检测的灵敏度。本研究将HIV-1核蛋白P24和Sup35朊蛋白融合表达,对组装形成的蛋白纳米线进行结合力的测定;将蛋白纳米线在三维空间上固定在磁珠上控制其长度,测定检测灵敏度,灵敏度显著提高。探索构建3D免疫探针方法的普遍适应性,选取了丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）、拉沙病毒（Lassa virus,LASV）和寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）三种病毒定为待检测对象,其抗原表位蛋白分别是HCV核心蛋白（core protein）、LASV核蛋白（nucleoprotein）和ZIKV囊膜蛋白（envelope protein）,将抗原表位蛋白和酵母朊蛋白Sup35和绿色荧光蛋白进行融合表达,表达的融合蛋白具有可溶性,并能够组装成纳米线。二、可逆赖氨酸乙酰化修饰调节大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶活性的研究。大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶可被乙酰化修饰,在体外以乙酰磷酸作为乙酰基供体对磷酸吡哆醇氧化酶进行乙酰化修饰,Western Blot测定乙酰化水平;再利用CobB对乙酰化修饰的蛋白进行去乙酰化,利用Western Blot测定乙酰化水平;测定乙酰化磷酸吡哆醇氧化酶和去乙酰化的磷酸吡哆醇氧化酶的催化活性,结果表明乙酰化作用降低酶活性,乙酰化的磷酸吡哆醇氧化酶去乙酰化后,酶活力提高。