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目的探讨白细胞介素21(IL-21)联合白细胞介素6(IL-6)作用于脐血来源的CIK细胞(细胞因子诱导的杀伤细胞)及Treg细胞(调节性T细胞)增强抗白血病效应的影响。方法1.体外分离正常足月产孕妇UBMCs,加用相应细胞因子建立CIK细胞培养体系。2.流式细胞术的方法阳性分选CD3+CD56+CIK效应细胞。3.CCK-8法检测外源IL-21及IL-6作用下CD3+CD56+CIK效应细胞杀伤白血病细胞系K562及HL-60细胞的杀伤活性。4.CCK-8法检测外源IL-21与IL-6联合及分别作用下CIK细胞培养体系细胞的增殖能力。5.LDH释放法检测外源IL-21及IL-6刺激下CIK细胞培养体系细胞杀伤白血病细胞系K562及HL-60细胞的作用。6.流式细胞术的方法检测IL-21及IL-6作用下CIK细胞培养体系细胞免疫表型的变化。结果1.IL-21联合IL-6增强CD3+CD56+CIK细胞杀伤白血病细胞的效应：在效靶比为20：1时,IL-21+IL-6组CD3+CD56+CIK细胞对K562及HL-60细胞的杀伤率达最高值[(59.63±2.13)%、(45.72±3.85)%],均高于其它各组,而IL-21组[(48.37±3.06)%、(35.49±2.72)%]和IL-6组[(47.09±1.25)%、(33.99±1.83)%]两组间细胞杀伤效应未见明显差异,但是均高于对照组[(40.68±1.91)%、(23.77±3.01)%]。2.IL-21联合IL-6增强CIK细胞培养体系细胞的增殖能力：以CCK-8法检测各组细胞增殖能力发现,IL-21与IL-6联合或单独作用均可增强此细胞体系的增殖能力(以各组吸光度值反映增殖),然而,IL-21组与IL-6组间无明显差异,但是,IL-21+IL-6组增殖能力明显高于其他各组(P<0.01)。3.IL-21联合IL-6增强CIK细胞培养体系细胞杀伤白血病细胞系K562及HL-60细胞的能力：在效靶比为20：1时,对照组细胞对K562及HL-60细胞的杀伤率[(29.31±0.58)%、(20.14±1.27)%]均明显低于各实验组(P<0.01),而IL-21+IL-6组杀伤率[(63.79±0.91)%、(41.53±1.43)%]均高于IL-21组[(52.99±1.26)%、(33.04±1.68)%]和IL-6组[(53.05±1.52)%、(32.18±3.83)%](P<0.01),IL-21与IL-6组间差异无统计学意义。4.IL-21联合IL-6增加CIK细胞培养体系中CD3+CD56+细胞比例,同时降低体系中CD4+Foxp3+Treg细胞比例：在细胞培养第7天,与对照组相比,IL-21组CD3+CD56+CIK细胞比例由(7.30±1.20)%上升至(12.52±1.45)%,IL-6组升至(11.01±1.04)%,IL-21+IL-6组升至(20.8±2.33)%,而IL-21组CD4+Foxp3+Treg细胞表达由(26.18±1.03)%降至(10.95±1.49)%,IL-6组降至(17.91±1.95)%,IL-21+IL-6组降至(5.25±0.54)%；在第14天,IL-21与IL-6组的CD3+CD56+CIK细胞比例为对照组的2倍,IL-21+IL-6组为对照组的2.5倍,而Treg细胞比例在IL-21组由(9.24±0.42)%降至(1.48±0.06)%,IL-6组降至(3.96±0.11)%；IL-21+IL-6组Treg细胞降至(0.83±0.08)%。结论1.IL-21联合IL-6可直接作用于CD3+CD56+效应细胞增强其对白血病细胞系K562及HL-60细胞的杀伤作用。2.IL-21联合IL-6可显著促进CIK细胞培养体系细胞的增殖及抗白血病能力,同时可明显增加CD3+CD56+效应细胞比例,同时可显著降低该培养体系中Treg细胞比例。因此,IL-21联合IL-6不仅可以直接增加CIK细胞的数量及功能,同时可通过降低Treg细胞比例来间接增强其抗白血病效应。