刺络泻血疗法(以下简称“刺血疗法”)是中医疗法的重要组成部分,隶属于针刺疗法,古称“刺络”、“启脉”,今称“刺血疗法”、“放血疗法”等。笔者导师临床中发现刺血疗法对肝纤维化(Hepatic Fibrosis,HF)的疗效显著。相关文献也表明,针灸疗法可以有效防治HF。基于导师临床经验以及相关文献研究结果,课题组设计实验,采用足三里、太冲、阳陵泉附近血络刺血的方法对四氯化碳(CCL4)诱导的HF大鼠模型进行干预,重点观察模型大鼠肝脏组织形态学变化、肝组织中肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)凋亡情况以及凋亡控制基因Bcl-2、Bax的表达情况,总结刺血疗法对HF的疗效,探究刺血疗法治疗HF的内在机制,以期为临床治疗HF提供一种新的思路和方法。本论文分为文献研究和实验研究两部分：一、文献研究文献研究部分包括三篇综述：综述一总结刺血疗法的发展状况,以时间阶段为分割点,分析各个时期刺血疗法的特点及创新。综述二探讨祖国医学对HF的认识,总结中医药尤其是针灸和刺血疗法防治HF的优势和不足,展望中医药治疗HF的未来。综述三总结HSC凋亡的研究进展,探讨调控HSC凋亡的基因、蛋白、细胞因子以及中医药相关因素,发掘中医药调控HSC凋亡的优势和潜力。二、实验研究1 实验目的本实验以四氯化碳(CCL4)诱导SD大鼠HF模型,选取足三里、太冲、阳陵泉附近血络进行刺血干预,观察刺血疗法对HF大鼠肝脏病理形态、肝星状细胞凋亡及凋亡控制因子Bcl-2、Bax表达的影响,探究刺血疗法治疗大鼠HF的疗效和作用机制。2 实验方法Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,雄性,随机分为4组,A正常组(12只)、B模型组(12只)、C秋水仙碱组(12只)以及D刺血组(12只)。除正常组外,其余三组应用40%CCL4(花生油稀释)诱导HF模型,为期6周。从第7周开始,模型组、秋水仙碱组和刺血组继续注射40%CCL4,同时秋水仙碱组给予秋水仙碱200μg/kg/d,5次／周灌胃；刺血组选取足三里、太冲、阳陵泉附近血络刺血0.15-0.2ml,2次/周,至12周。实验过程中,密切观察大鼠的一般情况。12周后麻醉大鼠,开腹,选取肝左叶小块肝组织石蜡包埋、切片,行Masson染色观察肝脏的组织形态学改变；TUNEL法检测HSC的凋亡；荧光半定量PCR法检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达。3 实验结果3.1 一般情况：正常组大鼠的发育、体重、毛发、精神状态等一般情况良好；模型组大鼠发育迟缓、饮食差、体重减轻,毛色发黄、干枯、无光泽,精神状态差；秋水仙碱组和刺血组一般情况较正常组差,但优于模型组。3.2 肝组织形态学改变：Masson染色图片显示正常组大鼠肝小叶结构完整,仅在汇管区周围可见有少量胶原纤维染色；与正常组相比,模型组大鼠肝小叶结构消失,汇管区周围纤维架桥形成,HF明显,说明造模成功；与模型组相比,秋水仙碱组和刺血组大鼠HF程度明显减轻,但比正常对照组要重,说明两组治疗有效。3.3 HSC凋亡情况：正常组HSC凋亡个数较少,其余各组HSC凋亡数目明显增多；与模型组比较,秋水仙碱组和刺血组HSC凋亡数目增多(P<0.05,P<0.01)；与秋水仙碱组比较,刺血组HSC凋亡数目更多(P<0.05)。3.4 Bcl-2、Bax表达情况：与模型组比较,秋水仙碱组和刺血组Bcl-2的表达显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05), Bax的表达均值有所升高,但差异无统计学意义。提示刺血疗法可以显著下调Bcl-2的表达,轻度上调Bax的表达,影响不大。4 实验结论4.1 刺血疗法可以有效治疗大鼠HF,促进HF模型大鼠HSC的凋亡,减轻HF模型大鼠肝脏纤维化程度。4.2 刺血疗法可显著下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,并轻微上调凋亡促进基因Bax的表达。4.3 刺血疗法可有效治疗大鼠HF,其作用机制可能与促进HSC凋亡,显著下调凋亡抑制基因Bcl-2表达,上调凋亡促进基因Bax表达,改变Bcl-2/Bax比值有关。