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禽致病性大肠杆菌是一种在家畜养殖业中最常见的致病菌,禽致病性大肠杆菌感染会使家禽死亡率增加,给养禽业带来巨大的经济损失。已有转录组学实验证实了lsrR的敲除会影响到大肠杆菌100多个基因的转录水平,这涉及到了生物被膜形成、转录调控、压力环境下的蛋白表达及营养获取等生理活动。经查找文献发现MFS外排泵中的转运蛋白MdtH对诺氟沙星具有抗性。此实验揭示了禽致病性大肠杆菌lsrR缺失对于耐药基因mdtH的影响,进而阐明了lsrR对耐药基因mdtH的调控机制。1.用二倍稀释法验证诺氟沙星,氧氟沙星,环丙沙星和四环素对WT(AEPC40)和XY10(AEPC40AlsrR)的耐药程度。结果发现,WT和XY10对四种抗生素的MIC值是一样的。用CFU法检验抗生素对WT和XY10耐药性的影响,结果显示四种抗生素对WT和XY10的影响趋势是一致的,XY10的CFU值都比WT的CFU值高2倍以上。2.构建lsrR和mdtH的过表达菌株,在四种抗生素压力下,过表达菌株WT/pUClsrR 的 MIC 值与 WT/pUC19 和 XY10/pUC19 的 MIC 值相比降低了 8 倍,在四环素压力下过表达菌株WT/pUClsrR的MIC值与WT/pUC19和XY10/pUC19的MIC值相比降低了 4倍。在这四种抗生素下,WT/pUClsrR的CFU比WT/pUC19降低了 5倍以上,WT/pUCmdtH的CFU 比 WT/pUC19升高了 2倍以上。表明lsrR的缺失可能对mdtH的转录水平有调控作用。3.采用 RT-qPCR 验证 WT/pUC19、WT/pUClsrR、WT/pUCmdtH、WT/pSTV28、XY10/pSTV28和XY10/pClsrR这几株菌株关于基因mdtH的转录水平。结果表明,lsrR的缺失能使mdtH的转录水平上调。4.采用EMSA实验检测到mdtH基因启动子区域与LsrR蛋白特异性结合。证明了 LsrR蛋白直接调控耐药基因mdtH的转录。该研究的进一步研究或可为治疗禽致病性大肠杆菌提供新的药物靶标与治疗思路。