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目的:利用肝癌细胞表面高表达转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)的特点,构建转铁蛋白受体介导的Survivin反义RNA/HSP70双基因转移系统并观察其对人肝癌细胞的靶向杀伤效应。
方法:用EDC法制备转铁蛋白受体抗体(即CD71抗体)与多聚左旋赖氨酸(PLL)的复合物,将携带有外源基因的质粒DNA与转铁蛋白受体抗体结合在一起,形成一种可溶性的蛋白-核酸复合物。根据DNA阻滞实验的结果,重组质粒与Ab-PLL复合物按1:1混合,得到Ab-PLL-DNA双基因转移系统,将此复合物通过体外转染人肝癌HepG2细胞观察其对肝癌细胞的靶向杀伤效应。
结果:成功制备了Ab-PLI-pIRES2-DsRed2 Survivin反义RNA/HSP70双基因转移系统,并通过TfR的内吞作用将外源基因导入肝癌细胞并得以表达。转染复合物组HepG2细胞的增殖抑制、凋亡指数增加、热休克蛋白70表达增强。
结论:Ab-PLL-DNA双基因转移系统具有良好的靶向性、安全性,该基因转移系统的构建为肝癌的基因治疗提供了实验基础。