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研究目的:建立检测类风湿关节炎(RA)外周血单个核细胞(PBMC)中TGF-β/Smad(转化生长因子-β/Smad)信号转导通路相关因子的表达水平的实时荧光定量PCR的方法,评价TGF-β/Smad信号转导通路相关因子在RA中的表达水平,及其在疾病的发生、发展、归转等方面的临床意义;并探索其在RA中医证候分型中的作用,为研究RA的发病机制及治疗提供新的理论根据。研究方法:采用套式实时荧光定量PCR(Nested-Real-Time-PCR)及普通实时荧光定量PCR(Conventional-Real-time-PCR)的方法,检测人PBMC中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7mRNA表达水平。提取PBMC中的RNA,逆转录成cDNA作为PCR模板,根据TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7基因序列设计引物,用SYBR GreenⅠ荧光染料掺入法作Real-Time-PCR,检测人PBMC中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7 mRNA的表达水平。研究结果:通过检测58例RA患者与29例健康人群对照组PBMC中的TGF-βRⅡ、Smad4、Smad7mRNA表达水平及其Smad4/Smad7比值,RA患者组中的TGF-βRⅡ、Smad4、Smad4/Smad7比值比健康人群对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);Smad7mRNA的表达水平与健康人群对照组相比,差异无统计学意义。将RA患者的不同临床分期和治疗前后的TGF-βRⅡ、Smad4mRNA表达水平及Smad4/Smad7比值作比较,RA活动期高于非活动期,治疗前高于治疗后,差异有统计学意义(P＜0.01);将RA患者关节功能不同分级的TGF-βRⅡ、Smad4mRNA表达水平及Smad4/Smad7比值作比较,Ⅲ级以上高于Ⅰ级和Ⅱ级,差异显箸(P＜0.01),Ⅰ级和Ⅱ级相比(P＞0.05),无统计学意义。在RA各中医证型分组比较中,TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7 mRNA的表达水平之间没有差异;但Smad4/Smad7比值对中医证型分组有一定意义,在湿热痹阻和肝肾亏虚兼痰瘀痹阻组与寒湿痹阻组比较中,Smad4/Smad7比值升高,有显著性差异。并将相关因子作相关性分析,Smad4与TGF-βRⅡ、Smad4/Smad7比值呈正相关(r值分别为0.262,0.268,P1＜0.05,P2＜0.05),TGF-βRⅡ与Smad4的表达高峰期均在病程的5-10年。研究结论:RA患者PBMC中的TGF-βRⅡ、Smad4mRNA表达水平及Smad4/Smad7比值高于健康人群对照组;活动期高于非活动期,治疗前高于治疗后;RA患者关节功能分级中,Ⅲ级以上高于Ⅰ级和Ⅱ级;并发现Smad4/Smad7比值对中医证型分组有一定意义;其检测指标可作为RA的辅助诊断和判断RA活动性、预后以及RA关节损伤的严重程度的指标。