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利用酿酒酵母来高效表达纤维素酶以直接利用木质纤维素料产醇将有助于降低纤维素乙醇生产成本。为揭示影响纤维素酶在酿酒酵母中表达的关键因素,获得高效锚定或分泌表达纤维素酶工程菌株,本研究首先系统考察了锚定肽类型、宿主背景、基因拷贝数、培养条件等对瑞氏木霉内切酶II(简写为TrEGII)和棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶I(简写为AaBGL)在酿酒酵母中锚定表达的影响,然后利用δ序列同源重组整合方式在工业菌株中分泌表达AaBGL,对所得工程菌株进行了综合评价,探讨其进一步改造成为CBP菌株的应用潜力。TrEGⅡ锚定表达的研究对前期工作和本工作构建得到的共24个工程菌株进行了生长和酶活评价,结果表明:(1)锚定肽类型显著影响酶活分布,在细胞上的酶活占总酶活的比例按Cwp2、Linker-Cwp2、AGα顺序递增,AGα锚定比例可达到86.3%;(2)锚定肽类型也影响总酶活水平,以含Cwp2锚定肽EW3菌株总酶活最高,达到1.200 U/ml/OD660;锚定表达总酶活显著低于分泌表达总酶活,后者可达1.784 U/ml/OD660;(3)提高基因的拷贝数能显著提高TrEGII总酶活水平,但基本不影响其细胞酶活占总酶活的比例。AaBGL锚定表达的研究对5个工程菌株进行了生长和酶活评价,结果表明:(1)锚定肽类型显著影响AaBGL酶活分布,含AGα锚定肽菌株与含Cwp2锚定肽菌株在细胞上的酶活占总酶活的比例相近,约为93%;(2)锚定肽类型对总酶活水平有显著影响,以含Cwp2菌株总酶活最高,达到0.066 U/ml/OD660;锚定表达总酶活也显著低于分泌表达总酶活,后者可达到0.1200 U/ml/OD660;(3)提高基因的拷贝数能显著提高AaBGL总酶活,但同样基本不影响其细胞酶活占总酶活的比例;(4)W303-1A宿主和工业菌株宿主酶活表达差异不显著。AaBGL分泌表达的研究利用δ序列同源重组整合方式在工业酿酒酵母菌株中分泌表达AaBGL,对所得工程菌株进行了生长、酶活以及利用纤维素发酵产醇能力的综合评价,结果表明:(1)δ序列同源重组整合方式在工业酿酒酵母菌株中也能取得好的应用效果;(2)β-葡萄糖苷酶的表达不影响菌株生长;酶活水平最高可达3.19 U/ml;在10%固含、10 FPU/g Biomass纤维素酶酶制剂、不外加β-葡萄糖苷酶的情况下,最大乙醇浓度可达到3.98%,高于利用安琪酵母的对照(最大乙醇浓度为3.13%)。本研究有助于加深对在酿酒酵母中表达外源基因规律的认识,进而充分发挥其在蛋白生产和乙醇发酵上的应用潜力。