背景和目的：前列腺癌是男性最高发的恶性肿瘤，同时也是男性癌症相关死亡的第二大原因。前列腺癌容易发生远处转移，骨转移是前列腺癌最常见的远处转移位点，严重影响患者的生活质量，并给社会和患者家庭带来沉重的经济负担。可疑病灶的组织活检是骨转移诊断的“金标准”，但临床实施困难，应用较少；临床医生往往借助SPECT全身骨显像、MRI以及PET-CT等影像学检查辅助诊断，但也存在价格昂贵、具有辐射以及准确性欠佳等问题。研究发现,外泌体中的miRNA可以作为多种疾病潜在的生物标志物，但在前列腺癌骨转移中的研究尚少，临床价值值得进一步研究。本研究旨在从前列腺癌骨转移与非骨转移患者血浆中提取外泌体，通过高通量测序分析获取外泌体miRNA的差异表达谱，并筛选其中差异表达的miRNA进行RT-qPCR验证，以评估其作为前列腺癌骨转移生物标志物的临床应用价值。
　　方法：研究纳入2019年3月至2019年6月就诊于江苏省苏北人民医院泌尿外科前列腺癌病人30例，实验组（骨转移组）15例，对照组（非骨转移组）15例。收集纳入患者外周静脉血10ml，初步离心获取血浆，使用超速离心和透射电镜进行血浆外泌体的提取和鉴定。应用高通量测序分析3例骨转移及3例非骨转移患者血浆外泌体miRNA的表达水平，获得血浆外泌体miRNA的差异表达谱。结合基因数据库以及现有文献信息，筛选出具有潜在研究价值的差异表达miRNA，将剩余的12例骨转移及12例非骨转移血浆外泌体进行定量PCR检测验证。SPSS26.0软件统计分析筛选miRNA在骨转移组及非骨转移组间的差异表达情况，绘制ROC曲线评估筛选miRNA对前列腺癌骨转移的诊断效能。
　　结果：我们用透射电子显微镜观察经高速离心分离提取的血浆外泌体样本，可观察到圆形或者椭圆形囊泡状结构，结构基本完整，囊泡直径在30～200nm范围内，具有典型外泌体的大小和形态。3例骨转移及3例非骨转移患者血浆外泌体miRNA高通量测序的差异表达谱显示，两组间共61个差异表达miRNA，其中30个miRNA在骨转移组中表达上调，31个miRNA表达下调。我们从差异表达谱中筛选出上调的hsa-miR-141-3p，将剩余的12例骨转移及12例非骨转移血浆外泌体进行定量PCR检测，统计分析结果显示，骨转移组血浆外泌体中hsa-miR-141-3p相对表达量高于非骨转移组，差异有统计学意义(P=0.039)，与测序表达趋势一致。根据PCR相对表达量值绘制ROC曲线，AUC为0.736(95％CI=0.532～0.940)，hsa-miR-141-3p对前列腺癌骨转移的诊断灵敏度和特异度分别为0.667和0.833。
　　结论：以上研究结果表明，通过超速离心法我们可以从前列腺癌患者血浆中成功提取到外泌体样本。应用高通量测序可以得到前列腺癌骨转移与非骨转移之间血浆外泌体miRNA的差异表达谱，其中30个miRNA表达上调，31个miRNA表达下调。前列腺癌骨转移患者血浆外泌体hsa-miR-141-3p表达水平显著高于非骨转移患者（P＜0.05)，与高通量测序结果一致，这也进一步证实高通量测序表达谱是可信的。前列腺癌患者血浆外泌体hsa-miR-141-3p对骨转移具有一定的临床诊断价值，有望成为前列腺癌骨转移诊断以及治疗监测的生物标志物。