毒氟磷(Dufulin)是中国自主研发的新型植物抗病毒剂,目前被广泛应用于预防和控制南方水稻黑条纹矮病毒(southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)。在抗SRBSDV的研究中表明,毒氟磷因具有较强的内吸作用,与病毒外壳蛋白结合(coat protein,CP)破坏病毒外壳使病毒无法增殖,同时其通过激活水杨酸信号分子进而激活下游的植物防御因子,提高作物系统抗病性,从而表现出良好的抗病毒活性。马铃薯X病毒(potato virus x,PVX)为马铃薯X病毒属代表成员,基因组由一条正单链RNA分子组成,长度约6.4 kbp,其含有5个开放阅读框(ORF),分别编码166 k Da的RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,Rd Rp)、25 k Da的TGBp1蛋白、12 k Da的TGBp2蛋白、8 k Da的TGBp3蛋白和25 k Da的病毒外壳蛋白。自然条件下PVX主要依靠摩擦进行机械传播,常与其他植物病毒(如potato virus y,PVY)复合侵染,对作物造成严重病毒病害。在本课题中,我们针对毒氟磷对PVX是否具有防治作用展开了相关研究。首先对健康的本氏烟植株进行毒氟磷的预处理,以水处理为对照,在处理后2天接种带绿色荧光标记的PVX-GFP,PVX的发病进程表明,毒氟磷预处理的植株发病延迟,通过实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative,PCR)和免疫印迹法(Western Blot)检测到毒氟磷预处理组PVX积累量明显降低,说明毒氟磷对PVX的侵染具有一定的预防作用。而在PVX已经侵染的植株上用毒氟磷处理后,实验结果表明病毒的积累量无明显变化,表明毒氟磷对PVX的治愈效果不明显。为了进一步解决治愈PVX侵染的问题,我们通过GFP磁珠共沉淀,筛选与PVX致病因子p25相互作用的蛋白,尝试从蛋白互作的策略出发阻断p25的功能。通过质谱鉴定,我们初步筛选到了20个可能与致病因子p25互作的植物寄主蛋白。通过双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,Bi FC)和病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术深入分析了本氏烟SGS3基因和病毒侵染的关系。综上所述,本实验通过研究毒氟磷对PVX侵染的影响,明确了毒氟磷对PVX具有预防作用,为后期揭示毒氟磷抵抗PVX机制研究提供生物学基础。同时通过GFP磁珠共沉淀初步筛选到20个与PVX致病因子p25相互作用的候选蛋白本,为后续从蛋白互作策略阻断p25功能研究奠定基础。