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目的:研究细胞迁移相关蛋白Angiomotin(Amot)在骨转移前列腺癌细胞PC3-mm2迁移中的作用及相关机制,为PCa骨转移的防治提供研究基础。方法:1.利用慢病毒感染包装技术构建Amot稳定过表达细胞PC3mm2-Amot和阴性对照细胞PC3mm2-CDH;利用细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测PC3mm2-Amot细胞的迁移能力;2.利用q RT-PCR技术检测PC3mm2-Amot中骨转移相关基因m RNA的表达变化;构建质粒p IRES2-Amot,同时以p IRES2-EFGP为阴性对照,分别瞬时转染PC3细胞中过表达Amot,Western blotting检测β-catenin的核内表达。将质粒p IRES2-Amot和pc DNA-β-catenin瞬时转染PC3细胞中分别过表达Amot和β-catenin,利用免疫共沉淀技术(anti-Cad11抗体免疫共沉淀)分别检测免疫复合物中Amot与β-catenin的表达;利用免疫共沉淀技术(anti-Amot抗体免疫共沉淀)检测PC3mm2-Amot细胞中Patj与Amot的结合情况。结果:1.成功构建了Amot稳定过表达细胞株PC3mm2-Amot。细胞划痕实验结果显示,PC3mm2-Amot细胞在5 h和10 h内的细胞迁移能力较对照细胞PC3mm2-CDH明显增强(P<0.05),划痕愈合率分别为10.2%±0.6%和19.0%±0.8%。Transwell细胞迁移实验结果显示当transwell下室为10%FBS的培养基时,实验组平均每高倍视野(×200)迁移出膜细胞数为对照组的3.62倍,迁移促进率为263.6%(P<0.05)。当transwell下室为成骨细胞条件培养基时,实验组平均每高倍视野(×200)迁移出膜细胞数为对照组的2.46倍,迁移促进率为146.2%(P<0.05)。当transwell下室为成骨细胞共培养时,实验组平均每高倍视野(×200)迁移出膜细胞数为对照组的1.98倍,迁移促进率为97.96%(P<0.05)。2.q RT-PCR结果表明,与PC3mm2-CDH细胞相比,PC3mm2-Amot细胞中骨转移相关基因COX-2、C3上调最为显著,而CXCR4、MCP-1、IL-6、PTHrp无明显改变;Western blotting结果表明Amot在PC3细胞中的过表达导致β-catenin的核内表达增强;anti-Cad11抗体免疫共沉淀结果显示,在PC3细胞中分别过表达Amot或β-catenin,均会导致β-catenin或Amot与Cad11结合的下降,即p IRES2-Amot转染组中Amot和Cad11结合的蛋白量显著增加,β-catenin与Cad11结合的蛋白量显著减少;pc DNA-β-catenin转染组中Amot和Cad11结合的蛋白量显著减少,β-catenin与Cad11结合的蛋白量显著增加。anti-Amot抗体免疫共沉淀结果显示并未检测到Patj蛋白条带。结论:1.Amot过表达可促进骨转移性前列腺癌细胞PC3-mm2的迁移。2.在骨转移性前列腺癌细胞中,Amot的过表达可导致β-catenin核内表达增高,并且二者对Cad11的结合存在相互竞争的关系,同时Amot过表达导致COX-2和补体C3表达升高,进而导致破骨细胞发生和重塑,引起溶骨性损伤。3.Patj信号通路并不是Amot在骨转移性前列腺癌细胞中的主要信号途径。