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目的1.检测胃癌患者外周血中HLA-DR阳性细胞的相对表达量。2.从基因和蛋白质水平分析胃癌患者HLA-DR阳性单个核细胞PTEN及PI3K/AKT信号通路特点,探讨PI3K/AKT信号通路在HLA-DR阳性单个核细胞中的调控作用。方法收集37例胃癌患者和33例健康人5ml EDTA抗凝的外周血液标本,通过流式细胞分析仪检测上述标本HLA-DR细胞的相对表达量。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。HLA-DR阳性细胞的分选:用免疫磁珠法手工分选PBMC内HLA-DR阳性和阴性细胞。将分选后的HLA-DR阳性和阴性细胞分别进行核酸和蛋白质的提取,检测基因和蛋白质水平上的PTEN、PI3K、AKT、m TOR相对表达量,分析PI3K/AKT信号通路对HLA-DR阳性细胞的调节作用。以上实验数据重复三次,取其均数,结果以`X±S的形式描述,采用SPSS18.0进行统计数据处理,对于符合正态分布的数据组间差异性分析采用方差分析。P<0.05时有统计学差异。结果1.流式结果显示,HLA-DR细胞在胃癌患者与健康人外周血的相对百分比分别为[(13.11±3.01)%vs(9.02±1.42)%]。方差分析结果显示,P=0.01,<0.05,俩组数据存在差异。提示胃癌发生时,HLA-DR细胞在外周血的相对表达量明显高于健康对照组。2.Realtime PCR结果显示,健康人HLA-DR阳性细胞基因PI3K,m TOR的相对表达量高于HLA-DR阴性细胞,AKT的相对表达量无明显差异,但是,PTEN的表达却相反,在健康人HLA-DR阳性细胞的表达量低于阴性细胞,提示我们健康状态下,HLA-DR阳性细胞PTEN低表达有利于此类细胞PI3K信号通路的活化;肿瘤病人,PI3K,m TOR在HLA-DR阳性细胞的相对表达量高于阴性细胞,与健康人相同,但是,PTEN在阳性细胞中的表达量显著高于阴性细胞,于是我们推测,胃癌状态下,PTEN在肿瘤患者HLA-DR阳性细胞的高表达有可能成为HLA-DR阳性细胞PI3K信号通路的负性调控因素;之后,我们又分别比较了胃癌患者和健康人HLA-DR阴性和阳性细胞PI3K通路基因的表达,发现俩组人群,HLA-DR阴性细胞PI3K信号通路基因表达的差异性不显著,然而,HLA-DR阳性细胞却有明显差异,PI3K,m TOR在胃癌患者的表达明显低于健康对照,这意味着在基因水平上,胃癌患者HLA-DR阳性细胞PI3K信号通路的活化不如健康人群HLA-DR细胞。3.Westernblot结果显示,PTEN在健康人HLA-DR阴性及阳性细胞的表达量分别为1.27±0.52,0.78±0.24,胃癌患者HLA-DR阴性及阳性细胞PTEN的表达量为2.55±1.20,3.17±1.39,以上数据方差分析后获悉,F=15.07,P=0.000,PTEN的表达量组间与组内差异比较均有意义,其中,胃癌患者HLA-DR阳性细胞PTEN表达量增高尤为显著;PI3K在健康人HLA-DR阴性及阳性细胞的表达量分别为0.58±0.18,1.51±0.47,胃癌患者HLA-DR阴性及阳性细胞PI3K的表达量为1.38±0.61,2.12±0.54,方差分析结果显示,F=10.21,P=0.000,PI3K的表达量在各组之间的差异有统计学意义,PI3K在胃癌HLA-DR阳性细胞的相对表达量最高;AKT在健康人HLA-DR阴性及阳性细胞的表达量分别为0.77±0.24,0.64±0.16,胃癌患者HLA-DR阴性及阳性细胞AKT的表达量为0.94±0.19,1.02±0.24,方差分析结果显示F=5.41,P=0.007,AKT在各组间的表达亦有显著性差异,AKT在胃癌HLA-DR阳性细胞的表达量也相对增高。结论1.胃癌发生后,HLA-DR的表达量增加,APCs细胞抗原呈递能力增强,意味着肿瘤发生时,机体免疫系统抗肿瘤能力增强。2.PTEN在胃癌HLA-DR阳性单个核细胞基因和蛋白水平都呈现高表达,在一定程度上可以抑制PI3K/AKT/m TOR信号同路的过度活化,抑制HLA-DR细胞的过度增殖,提供有节制性的免疫应答,减少了免疫应答造成机体二重损伤的风险。