论文部分内容阅读
牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis)是目前公认的慢性牙周炎的主要致病菌之一，研究发现不同P.gingivalis菌株的致病性存在广泛差异，基因的遗传异质性是细菌毒力和致病性差异的物质基础。菌毛是P.gingivalis黏附宿主组织的主要结构，有广泛的生物学活性，根据菌毛fimA基因开放阅读框架(open reading frame，ORF)核苷酸序列的差异，fimA基因分6型(Ⅰ～Ⅴ和Ⅰb型)。国内外流行病学调查结果显示，ⅡfimA型和ⅣfimA型P.gingivalis与日本人及中国牙周炎的发生发展显著相关，ⅠfimA型P.gingivalis与健康的牙周状态相关，提示不同fimA型P.gingivalis的致病能力可能不同，故fimA基因型有望成为筛选P.gingivalis毒力克隆株的候选基因，因次寻找P.gingivalis高毒力克隆株，探讨其致病机理，对牙周病的防治具有重要指导意义本研究采用ELISA方法从蛋白水平比较不同fimA型P.gingivalis刺激PMN表达牙周组织破坏性酶MMP-8、MMP-9的差异，从而进一步探讨不同fimA型P.gingivalis致病性差异的原因。方法本研究主要采用等密度沉降分离法分离人外周血的PMN，使其与临床分离鉴定纯化的不同fimA型P.gingivalis菌悬液作用5min、30min、1h、2h分别收集其反应上清液，然后用ELISA方法检测其中MMP-8、MMP-9的含量。结果：1、本实验选择的P.gingivalis标准菌株ATCC33277(ⅠfimA)、W83(ⅣfimA)以及课题组分离鉴定纯化的ⅡfimA、ⅢfimA、ⅣfimA型P.gingivalis刺激PMN产生MMP-8、MMP-9的能力都显著高于空白对照组，证明不同fimA型P.gingivalis刺激PMN产生牙周组织破坏性酶是其致病能力的一方面。2、P.gingivalis模式株W83(ⅣfimA)与临床分离菌株ⅡfimA型P.gingivalis刺激PMN分泌MMP-8在速度及量上均高于其他细菌；临床分离株ⅢfimA型P.gingivalis是所有细菌中刺激PMN分泌MMP-8最弱的细菌。提示：P.gingivalis标准株W83(ⅣfimA)、临床分离菌株ⅡfimA型P.gingivalis对PMN产生破坏性酶MMP-8方面强于P.gingivalis标准株ATCC33277(ⅠfimA)及临床分离菌株ⅢfimA、ⅣfimA型P.gingivalis。3、P.gingivalis标准株ATCC33277(ⅠfimA)、模式株W83(ⅣfimA)以及临床分离菌株ⅡfimA刺激PMN分泌MMP-9能力高于临床分离菌株ⅢfimA、ⅣfimA型P.gingivalis。提示：临床分离菌株ⅡfimA型P.gingivalis在刺激PMN产生MMP-9方面强于其他临床菌株，而与标准菌株ATCC33277(ⅠfimA)、W83(ⅣfimA)之间比较尚没有差异。结论：临床分离菌株ⅡfimA型P.gingivalis在刺激PMN产生MMP-8、MMP-9方面强于临床分离菌株ⅢfimA、ⅣfimA型P.gingivalis，临床株与标准株细菌之间可能存在致病能力方面的差异，需要进一步进行相应fimA型P.gingivalis的标准株和临床株之间致病能力的比较。