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目的:
临床研究表明,相同病理状态和临床分期的乳腺癌患者会有完全不同的预后。这一临床不确定性促使人们寻找更多与预后有关的指标。本研究旨在通过构建乳腺癌组织芯片,采用免疫组化方法,研究nm23、p53、ki-67、cyclinE在乳腺癌中的表达及其意义,筛选出有价值的指标,以指导临床治疗和估价预后。方法:
1.组织芯片的制作对照乳腺癌组织HE切片,选择富有肿瘤细胞且无出血坏死的区域,手工从供体蜡块中分别提取直径为2mm的组织芯,插入到受体蜡块中制作成1个组织芯片。另取13例作为对照,以验证免疫组化染色的效果。本组织芯片的可利用率为92.3﹪。从可用蜡块中随机抽取30例做普通切片免疫组化染色,用于验证组织芯片免疫组化表达的平行性和应用的可靠性。
2.免疫组织化学染色nm23、p53、Ki-67、cyclinE的检测采用免疫组化SP法,操作步骤严格按照试剂说明进行。普通切片亦按上述步骤完成免疫组化标记。
3.评定标准①nm23:胞浆着色。组织芯片按着色强度打分,普通切片根据阳性细胞率和阳性细胞着色强度分别记分,以上两项之和即为该例病变的nm23免疫组化评分。②p53、Ki-67、cyclinE阳性部位定位于细胞核。打分标准同上。
4.统计学分析应用SPSS10.0统计软件对所有数据进行处理,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果:
对照组显示免疫组化染色效果良好,阳性表达清晰。组织芯片与普通切片中nm23、p53、Ki-67和cyclinE的表达显著相关,差异经检验没有统计学意义(p>0.05),表明组织芯片与普通切片比较有很好的平行性和代表性。
nm23主要表达在癌细胞浆,间质细胞未见阳性着色,阳性率为65.63﹪。p53、Ki-67、cyclinE阳性表达主要见于胞核,呈清晰棕黄色,阳性率分别为40.63﹪、63.54﹪、55.21﹪。它们的表达与乳腺癌的病理特征显著相关(P<0.05)。与癌复发及转移的关系经Log-rank检验P均<0.01。由此可见乳腺癌组织中nm23、p53、ki-67、cyclinE的表达均与组织学分级、淋巴结转移、无病生存期有显著相关性(P<0.05)。
结论:
nm23蛋白与肿瘤的转移呈负相关,可作为乳腺癌患者的一种可靠的预后指标。p53突变的乳腺癌常表现为侵袭性强、转移率高和5年存活率下降,易产生对化疗药物耐受和对放疗不敏感,预后较差。Ki-67高表达的乳腺癌提示预后不良。CyclinE不仅是一个预测乳腺癌预后的有力标志物,还是一个识别内分泌治疗乳腺癌成败的标记。nm23、p53、ki-67和cyclinE的表达与乳腺癌的生物学行为有关,同时检测nm23、p53、ki-67和cyclinE可能对乳腺癌预后的判断及靶向治疗的选择提供更大的帮助。