论文部分内容阅读
Kex2蛋白酶(Kexin EC.3.4.21.61)是钙离子依赖型的蛋白水解酶，特异性的识别和切割双碱基氨基酸（-ArgArg-Lys-Arg-）羧基端肽键，属于丝氨酸家族的一种肽链内切酶。本论文在毕赤酵母细胞中成功表达了Kex2△p、Kex2p两种不同序列长度的Kex2蛋白酶，以及自降解位点Lys-Lys225和Lys-Lys436的突变体蛋白，并研究了各种Kex2蛋白酶衍生物的酶学性质。建立了简单Kex2蛋白酶的酶活检测方法。探讨了P-结构域对Kex2蛋白酶在酵母细胞中的表达和对Kex2分子本身稳定性的影响。 Kex2△p在毕赤酵母中以外分泌形式表达，通过优化表达条件，Kex2△p在上清中表达量为20mg/L，利用离子交换层析得到电泳纯的目的蛋白。在Kex2△p的研究基础上，构建了P-结构域完整的Kex2p表达菌株。Kex2p表达菌株培养上清中的蛋白酶含量比Kex2△p增加50％，在金属离子耐受性和温度稳定性方面有不同程度的提高。