Treg对大鼠增龄所致骨质疏松症的影响

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第一部分:增龄与骨密度的关系目的:通过检测不同年龄组雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠股骨、脊柱、骨盆、全身的骨密度,了解年龄增长对大鼠骨密度的影响。方法:选取6-8周龄、6月龄、12月龄、24月龄雄性SD大鼠每组各10只作为研究对象,采用双能X线吸收仪(DEXA)检测大鼠股骨、脊柱、骨盆、全身的骨密度。结果:6-8周龄、6月龄、12月龄、24月龄四组大鼠股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值不相同,差异有统计学意义(P=0.000)。6-8周龄组股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值均低于6月龄组、12月龄组、24月龄组,差异有统计学意义(P=0.000);6月龄组股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值低于12月龄组,差异均有统计学意义(P=0.000)。24月龄组股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值低于6月龄、12月龄组,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:大鼠股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值均随年龄增长而升高,6-8周龄时股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值最低,6月龄时骨密度开始增加,12月龄时达到最高值,24月龄时出现下降,提示SD雄性大鼠与人类相似,12月龄时骨密度达到高峰,24月龄时出现下降,具有与年龄相关的骨丢失。第二部分:调节性T细胞与老年性骨质疏松的关系目的:检测不同年龄组雄性SD大鼠血调节性T细胞(Treg)数量占CD4+T细胞百分比,了解Treg细胞对老年性骨质疏松症的影响。方法:大鼠心脏采血,采用CD25+联合FoxP3+表达来描述Treg细胞,流式细胞仪测定血Treg数量占CD4+T细胞的百分比。结果:1、6-8周龄组、6月龄组、12月龄组、24月龄组Treg数量占CD4+T细胞百分比不同,差异有统计学意义(P=0.00)。6-8周龄组Treg数量百分比低于6月龄组、12月龄组、24月龄组,差异有统计学意义(P=0.000);6月龄组Treg数量百分比低于12月龄组、24月龄组(P<0.05);24月龄组Treg数量百分比低于12月龄组比较,但差异无统计学意义(P>0.05)。2、Treg数量占CD4+T细胞百分比与股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值均成正相关,差异均有统计学意义(P=0.000)。结论:1、6-8周龄组、6月龄组、12月龄组、24月龄组Treg数量占CD4+T细胞百分比不同,6-8周龄时最低,6月龄时开始升高,12月龄时达到最高值,24月龄时出现下降,提示不同年龄组大鼠Treg数量占CD4+T细胞有明显差异。2、Treg数量占CD4+T细胞百分比与检测部位骨密度值呈正相关性,提示随着Treg数量百分比的增高,骨吸收减少,骨密度值升高,随着Treg数量百分比的降低,骨密度降低,鉴于随着年龄的增长,Treg数量出现下降,我们推测外源性注射Treg可抑制破骨细胞性骨吸收,可成为治疗老年性骨质疏松的新方向。第三部分:Treg对老年性骨质疏松OPG-RANK-RANKL系统的影响目的:通过检测不同年龄组SD雄性大鼠RANKL、OPG的血清水平,进一步了解Treg对老年性骨质疏松症OPG-RANK-RANKL系统的影响。方法:大鼠心脏取血,ELISA测定RANKL、OPG的血清水平。结果:1、6-8周龄、6月龄、12月龄、24月龄四组间RANKL血清水平不同,差异有统计学意义(P=-0.00)。6-8周龄组高于6月龄组、12月龄组、24月龄组,差异有统计学意义(P<0.05),6月龄组高于12月龄组,差异有统计学意义(P=-0.008),6月龄组与24月龄组比,差异无统计学意义(P=-0.928),12月龄组低于24月龄组,差异有统计学意义(P=0.010)。2、6-8周龄、6月龄、12月龄、24月龄四组间OPG血清水平不同,差异有统计学意义(P=-0.00)。6-8周龄组高于6月龄组,但差异无统计学意义(P=0.082),6-8周龄组高于12月龄组、24月龄组,差异有统计学意义(P=0.000),6月龄组高于12年龄组、24月龄组,差异有统计学意义(P<0.05),12月龄组高于24月龄组,差异有统计学意义(P=0.018)。3. RANKL血清水平与股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值、Treg百分比均成负相关,差异有统计学意义(P<0.01)。4、OPG血清水平与股骨、脊柱、全身骨密度值均成负相关,差异有统计学意义(P<0.05),与骨盆骨密度值无相关性。结论:1、6-8周龄组、6月龄组、12月龄组RANKL血清水平随年龄增长而降低,24月龄组略升高,提示不同年龄组RANKL血清水平有明显差异。2、6-8周龄组、6月龄组、12月龄组、24月龄组OPG血清水平随年龄增长而降低,提示不同年龄组RANKL血清水平有明显差异。3、RANKL血清水平与股骨、脊柱、骨盆、全身骨密度值均成负相关,提示6-8周龄至12月龄时随着RANKL血清水平的下降,骨密度值逐渐升高,至24月龄时RANKL血清水平出现升高,而骨密度值出现下降。RANKL血清水平与Treg百分比均成负相关,提示6-8周龄至12月龄时随着Treg百分比的逐渐升高,RANKL血清水平逐渐下降,破骨细胞的分化减少,骨密度值逐渐升高,当24月龄时Treg百分比出现下降,RANKL血清水平出现上升,破骨细胞分化抑制减弱,出现骨密度减少,推测Treg可能抑制RANKL的表达,从而抑制破骨细胞的分化,减少骨吸收。4、OPG血清水平与股骨、脊柱、全身骨密度值均成负相关,提示随着年龄的增长,由于OPG血清水平的下降,骨密度值逐渐升高;OPG血清水平与骨盆骨密度值无相关性,提示OPG对骨盆骨密度值无明显影响。
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