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山东9个地区11个规模化猪场,自2011年以来猪群陆续发病,疫情不断,遭受了严重的经济损失。为了全面了解猪场的发病原因,从而有针对性地控制疫情,本研究对发病猪场送检的264份病料进行病原检测。结果发现,发病猪体内存在的主要病原及其分离率分别为:猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)占43.18%,流行性腹泻病毒(Epidemic diarrhea virus,缩写)占27.27%,猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)占31.64%;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)占58.33%,副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)占26.42%,大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)占32.85%,支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)占3.12%,绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)占2.51%。结果分析发现,诱发呼吸道疾病的病原(PRRSV、APP和Bb)的总分离率最高,其中原发和继发感染的APP分离率占主导地位,这可能是山东地区规模化猪场发病的主要原因之一。为了研制一种有效的疫苗来防控APP的危害,本研究对从山东规模化猪场送检病料中分离到的24株APP的培养特性、血清型、分子生物学特性进行了研究,并根据分离株毒力和免疫保护的相关结果,从中筛选出候选疫苗株。血清型鉴定结果表明,分离株的血清型分为1、2、5、7和10型,各有8、1、6、8、1株;其中血清1、5、7型分离株占总分离株的91.67%,因此,这三个血清型的菌株被用作疫苗株的参考。最终,根据致病性试验结果,分别从血清1、5、7型分离株中筛选出免疫原性好、毒力强的APPSD1101、APPSD1207、APPSD1103株作为生产用疫苗株,以制备猪传染性胸膜肺炎放线杆菌三价灭活疫苗。对筛选得到的三株疫苗株的最小致死量进行了测定:每个疫苗株设置五个浓度组(2.0×109CFU/ml、5.0×108CFU/ml、2.0×108CFU/ml、5.0×107CFU/ml、2.0×107CFU/ml)和空白对照组,共6组,每组接种5头6周龄健康易感商品猪,每头滴鼻攻毒3 ml。结果发现,APP血清1、5、7型的MID分别为1.5×108CFU、1.5×109CFU、6.0×108CFU。结果为疫苗的效力检测提供了实验依据。为了摸索该三价疫苗的生产工艺,本研究测定疫苗株在体外培养的最佳收获时间,并通过甲醛(甲醛浓度分为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%4组)在不同时间段灭活抗原,筛选最佳灭活条件,对疫苗的最小抗原量和最小免疫量进行测定;并对制备的疫苗进行物理性状、安全性以及免疫效力进行了检测。依据生长曲线的结果表明,调整种子液OD600值到0.5,然后按照3.0%的剂加入新培养液,37℃,160 rpm培养5 h-7 h时收获抗原最佳,此时的代谢产物少,抗原含量高,疫苗更安全;依据抗原灭活试验结果,制定的在实际生产过程中疫苗灭活条件为甲醛浓度0.3%,37℃下160 rpm搅拌15 h;通过最小抗原量试验结果测得,疫苗中最小抗原量APP血清1、5、7型分别为为2×109 CFU/ml、4×109 CFU/ml、1×109 CFU/ml,为实际生产过程中确定最低的抗原含量提供了参考依据;通过最小免疫量试验(结果与最小抗原量试验结果相符),本研究制定的免疫方式为:6周龄颈部肌肉注射1 ml/头;经过对制备的疫苗进行各项检测,制备的疫苗稳定性、安全性均符合相关标准,免疫三周后对血清1、5、7型菌株的免疫保护率可达90%~100%,效果良好。本研究为针对当前流行的传染性胸膜肺炎三价疫苗的制备以及临床应用提供了理论和技术支持。