不同降胆固醇能力植物乳杆菌差异表达蛋白研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luoxueyan191
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随着人们生活水平的提高,饮食结构也发生着重大转变,高胆固醇含量膳食的摄入逐渐增多。血清中胆固醇水平偏高是目前世界上导致人类死亡效率较高的心血管疾病的主要原因之一。植物乳杆菌能够降低体内胆固醇已被科学家所认可,但是降解机理仍不明确。本实验针对两株降胆固醇能力不同的植物乳杆菌从基因水平及蛋白水平进行研究,分析降胆固醇能力不同的原因。本实验前期已筛选出两一株具有降胆固醇能力的植物乳杆菌——植物乳杆菌Lp,通过对植物乳杆菌进行多次诱变处理,得到一株新的植物乳杆菌——植物乳杆菌Lp-UVs29。经过诱变的植物乳杆菌降胆固醇能力比原始菌株的能力提高了97.97%。利用二维凝胶电泳技术对两株植物乳杆菌进行差异蛋白筛选,质谱技术对筛选的差异蛋白进行验证,通过生物信息学分析得到一些与胆固醇代谢相关的蛋白。选出五个与胆固醇代谢相关的蛋白进行后续研究。根据NCBI上已发表的基因序列对目的基因进行引物的设计,进行克隆后送去上海生工生物有限公司进行测序及分析。实验结果表明,在两株菌中存在五个目的基因。测序结果表明烯醇化酶基因、NADH过氧化物酶基因、烯酰-酰基载体蛋白还原酶基、胆盐水解酶基因、羟甲基戊二酰脂酰辅酶A还原酶基因与已发表的植物乳杆菌的同源性均可达到99%以上。荧光定量PCR技术能够准确定量某样品中的mRNA表达情况。通过克隆及测序已经得到目的基因。以两株植物乳杆菌的cDNA为模板对五个目的基因进行荧光定量PCR扩增。实验结果表明,五个目的基因扩增效率较好。植物乳杆菌Lp中的烯醇化酶基因和NADH过氧化物酶基因的表达量高于植物乳杆菌Lp-UVs29,烯酰-酰基载体蛋白还原酶基因的表达量低于植物乳杆菌Lp-UVs29,胆盐水解酶基因的表达量和羟甲基戊二酰脂酰辅酶A还原酶的基因表达量均高于植物乳杆菌Lp-UVs29,且胆盐水解酶基因在植物乳杆菌Lp-UVs29中的表达量是在植物乳杆菌Lp中表达量的4.5倍,差异量非常显著。通过质谱鉴定及MRM方法的建立,最终在两株植物杆菌样品中都成功检测到这5个目标蛋白,9个目标肽段。结果显示这9个目标肽段在植物乳杆菌Lp-UVs29中质谱峰面积较高,说明这5个蛋白在植物乳杆菌Lp-UVs29中都是高表达。该5个蛋白在植物乳杆菌Lp-UVs29中表达量比植物乳杆菌Lp至少高3倍以上。
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