苯甲酸钠,苯甲酸的钠盐,常用于食品储存中的化学添加剂,以防止因微生物引起的食物腐败和霉变。苯甲酸和苯甲酸钠可抑制大部分的真菌、霉菌和细菌的生长。因为苯甲酸钠具有良好的稳定性以及良好的水溶性,所以它更广泛的应用于许多种类的食物和饮料中。然而,过量摄入这种添加剂或许会对消费者有潜在的危害性,比如会引起过敏性皮炎、荨麻疹、惊厥以及肝细胞的损害等等。此外,添加剂的过度使用会使防腐剂残留变作环境污染物。由于这些原因,食物中严格限制添加苯甲酸及其钠盐作为防腐剂。在我国,根据GB2760-2011国家卫生标准规定,在不同种类的食物中苯甲酸及其钠盐的限制适用量的范围是0.2-2.0g/kg。然而,因为苯甲酸及其钠盐价廉、易得,许多不法商家为了追求利益仍然在食品中大量添加这些防腐剂。因此,建立一种简单,快速,经济实用的分析方法用于测定苯甲酸及其钠盐对食品安全是非常重要的。用于测定苯甲酸及其钠盐的方法有很多。检测苯甲酸及其钠盐的传统分析方法有薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、毛细管电泳法(CE)、胶束电动力学色谱法。目前,苯甲酸及其钠盐的主要分析方法是高效液相色谱法(HPLC)。据报道还有很多其他方法用于苯甲酸及其钠盐的检测,包括二阶导数分光光度法、化学计量学增敏分光光度法、近红外反射光谱法、极谱法和酶检测。然而,这些分析方法都不够简便,所用的仪器比较昂贵,分析过程比较耗时,甚至在某些情况下,需要对样品进行提取、分离等各种预处理。免疫分析方法,尤其是酶联免疫吸附测定法(ELISA),具有简便、灵敏、特异性高,仪器设备简单的优势,并可以一次测定大量样品。然而,ELISA方法是固相的分析方法,需要多次重复清洗和一定的孵育时间(1-2小时)。荧光偏振免疫分析法(FPIA)是一种均相的筛选技术,不需要分离和清洗,可以快速、高效、简便地应用于食品和环境分析。目前还没有采用FPIA方法和ELISA方法检测实际样品中的苯甲酸及其钠盐的相关报道。基于此,本研究建立了用于检测苯甲酸钠含量的FPIA法和间接ELISA法,并成功将建立的FPIA方法应用于实际体系的检测。本研究根据苯甲酸的结构特征,设计合成了苯甲酸的免疫原、包被抗原和荧光标记抗原,得到了多克隆抗体。在优化出的最佳条件下,分别建立了用于检测苯甲酸钠含量的FPIA法和间接ELISA法。FPIA方法的灵敏度(IC50)为2.48μg/mL,检测限(IC20)为0.26μg/mL,工作范围是0.3μg/mL-20μg/mL。选择了11种苯甲酸的类似物与苯甲酸抗体进行了交叉反应的测定。在线性范围内检测该方法在理论体系和实际体系中的精密度和准确度,其加样回收率分别在91.41-106.27%和86.97-109.87%之间,变异系数均未超过11.25%。此外,还将此方法检测食品中的苯甲酸钠含量与HPLC方法相比较,进一步验证了其准确度。ELISA方法的灵敏度(IC50)为2.53μg/mL,检测限(IC20)为0.77μg/mL,工作范围在0.5μg/mL-μg/mL之间,还考察了苯甲酸抗体与多种结构类似物的交叉反应率。本实验的研究表明,免疫分析方法是一种快速、简便的方法,适用于苯甲酸及其钠盐在食物样品中的检测,并为免疫分析在检测食品中的其他添加剂的应用奠定了良好的基础。