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摘要：猪圆环病毒2型(porcine circovirus2, PCV2)作为断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)的病原,它不但能够导致断奶仔猪发生衰竭、死亡,还与猪发生的多种疾病密切关联。猪感染PCV2后,机体会处于免疫抑制状态,进而引起其他各种疾病病原的继发感染,由PCV2造成的间接生产损失难以估量。PCV2在当前已经成为严重阻碍养猪业健康发展的主要病原之一。目前,还缺乏一种适于大规模诊断和检测PCV2的可靠方法,因为PCV1在目前猪群中的感染相当普遍,并且PCV1与PCV2的核苷酸同源性非常高,在检测中易出现抗原交叉的现象。而临床用PCV2ORF2的表达产物来建立ELISA检测方法,就能够实现既有效区分PCV1和PCV2,又可以进行大规模化样本检测。本研究将截短的PCV2ORF2基因进行克隆,通过酶切反应连接于原核表达载体pGEX-4T-1中,在IPTG的作用下于感受态细胞E.coli BL21(DE3)以包涵体的形式得到表达,获得31KDa左右的蛋白。通过Western-Blot鉴定该表达蛋白为目的蛋白。原核表达蛋白使用GE Healthcare Histrap进行蛋白亲和层析纯化,利用该纯化蛋白为包被抗原,以抗PCV2阳性血清为一抗,羊抗猪酶标物为二抗,通过预试验确定诱导温度、诱导时间、摇动转速、IPTG浓度以及反应板种类等参数,从而建立间接酶联免疫吸附方法(I-ELISA)以检测抗PCV2猪血清抗体滴度。采用本研究建立的ELISA方法,我们测定了山东省内四个猪场送检的316份猪血清,获得每份血清中抗PCV2ORF2对应蛋白的抗体效价。分析试验数据可知,四个送检猪场血清样品的PCV2抗体阳性率均较高,其中4号场达到98%的阳性,其他三个场也在50%以上,全部血清的阳性率为74.45%(235/316),南此可见,四个地区送检猪血清的PCV2阳性率处于较高水平。据初步统计,这些地区送检猪场极少免疫接种PCV2疫苗,而猪体抗PCV2抗体水平较高,表明猪群携带病毒的比例是很高的,故加强猪场的PCV2疫情监控、及时按计划进行疫苗接种是十分必要和紧迫的。结果表明,本试验建立的间接ELISA检测方法敏感度高、特异性强,可用于临床PCV2血清抗体的检测。这为ELISA诊断试剂盒的研制开发奠定了基础,为建立规模化猪场PCV2感染的快速诊断方法提供了科学依据。