【摘 要】
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该论文主要是对Sep15的生物学性质及功能进行探索性研究.通过RT-PCR方法,获得人Sep15的全长基因,再通过巢式PCR和突变PCR将人Sep15基因ORF中的UGA密码子突变后克隆到原核表达
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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该论文主要是对Sep15的生物学性质及功能进行探索性研究.通过RT-PCR方法,获得人Sep15的全长基因,再通过巢式PCR和突变PCR将人Sep15基因ORF中的UGA密码子突变后克隆到原核表达载体pET-30a11d中.在pET原核表达系统中获得了人Sep15的高表达,用SDS-PAGE凝胶分离纯化后作为抗原制备抗血清用于检测Sep15的表达情况.Western印迹检测结果显示与原核表达人Sep15和菌体蛋白在约15kDa处有特异的识别条带,但没有检测到真核表达的人Sep15.同时,我们把Sep15的全长基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1上.将重组质粒pcDNA3.1-Sep15转染到Sep15低表达的人肝癌细胞系BEL-7402细胞,并获得稳定表达Sep15的BEL-7402-Sep15细胞株.分别从细胞形态、生长速率、克隆形成能力及裸鼠肿瘤形成能力等方面对BEL-7402-Sep15细胞,BEL-7402-pcDNA3.1细胞以及BEL-7402细胞进行比较,发现三种细胞无显著差异,提示转染Sep15不影响肝癌细胞系BEL-7402细胞in vitro和in vivo的生长特性.
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