Nisin抗菌肽抑制致龋菌和根管感染致病菌的体外研究

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由于细菌对抗生素的耐药性问题越来越严重,目前越来越多的人正在关注抗菌肽作用。Nisin抗菌肽是由益生菌乳酸链球菌(L. lactis)产生的34个氨基酸的多肽,具有很多优良的特性,是目前研究最为广泛的硫醚抗生素。然而目前有关nisin对口腔致病菌的作用研究报导较少。本研究我们着重对nisin抑制口腔致病菌的特性及其可能的机理进行了研究。首先,乳酸链球菌首次被引用抑制口腔中主要致龋菌变异链球菌(S.mutans)。我们发现乳酸链球菌在营养不足时可以竞争性抑制变链菌生长,并且变链菌代谢产物,包括一些外源性信号分子可以增强乳酸链球菌中nisin合成相关基因的表达。乳酸链球菌可以有效地粘附在牙釉质表面,但是对牙釉质表面侵蚀程度明显比变链菌小。第二,在最小抑菌浓度、最小杀菌浓度和Spot-on-lawn检测中,nisin对9种常见的致龋菌显示出了不同的抗菌作用,并且唾液中成份对nisin的抗菌性没有影响。此外场发射扫描电镜显示血链球菌、变链菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌经过nisin处理后其形态和胞膜均受到不同程度的破坏。第三,在nisin和氟化钠或洗必泰协同性抑制变链菌的检测中,通过棋盘法、部分抑菌浓度、部分杀菌浓度检测,我们发现nisin和氟化钠具有协同性抑制变链菌的作用,而nisin和洗必泰则不具有协同性。在时间杀死研究中,变链菌经过nisin和氟化钠联合处理后,细菌生存率明显下降。场发射扫描电镜显示在不同药物单独或联合处理中,nisin和氟化钠对变链菌破坏程度是最显著的。此外,在抗变链菌生物膜检测中,氟化钠联合nisin对4h和16h的变链菌生物膜的作用比氟化钠单独作用显示出更强破坏能力。这些研究结果表明,乳酸链球菌和抗菌肽nisin在抑制口腔致龋菌和预防龋病发生中具有良好的应用前景。MTAD (A mixture of tetracycline isomer, acid and detergent,一种四环类类药物、酸和去污剂的混合物)是良好的根管冲洗剂,在MTADN(MTAD联合nisin)对与牙髓感染有密切相关的9种致病菌抑制研究中,MTADN显示出快速和明显的抗菌作用。粪肠球菌(E. faecalis)是引起继发性和持续性牙髓感染的主要致病菌,在抑制粪肠球菌作用中,我们利用棋盘法和部分抑菌浓度检测了nisin和常用根管冲洗液MTAD的协同抗菌作用,结果显示nisin可以显著提高MTAD对粪肠球菌抑菌作用。MTADN对粪肠球菌最小抑菌浓度比MTAD和MTAN(用nisin代替MTAD中的多西霉素)低。当多西霉素和nisin联合应用时,nisin对细菌胞膜形成的孔洞可以有利于多西霉素分子进入到细菌胞内,更好发挥抗菌作用,因而nisin和多西霉素结合具有协同性抑制粪肠球菌的作用。场发射扫描电镜也显示MTADN对粪肠球菌破坏程度最为明显。这些研究结果表明nisin和MTAD联合应用,作为根管冲洗液,可以有效清除根管内的致病菌。
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