ADV基因的比较分析及VP2表位原核表达载体构建

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根据Genbank上发表的水貂阿留申病毒基因序列数据,使用5对引物,采用PCR的方法分别对的MS1、DL1、DL2、DL3株基因进行扩增,将各片断克隆至pMD18-T载体,经PCR鉴定进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行了分析和比较。与已发表的ADV株相关基因的核苷酸和氨基酸按读码框进行同源性进行比较、分析以期在全基因水平上做横向对比。比较得出国内毒株虽然各有变异,但在特殊位点及保守区域均与国外株保持一致。与Genbank上公布的毒株相比较国内毒株具有较大的同源性,并推测ADV进化过程中存在一定的地域性。根据文献设计2对引物对MS1株VP2部分进行扩增,将其回收、纯化后连接到线状克隆载体PMD18-Zeasy Vector将目的基因克隆到pMD18-T载体中,转化JM109感受态细胞。在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆,扩大培养,提取质粒,经酶切和PCR鉴定,将目的基因分别克隆到原核高效表达载体pGEX-6p-1、pET30a、pMAL-C2中。
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