经静脉移植干细胞促周围神经损伤修复研究

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目的评价周围神经损伤后Wallerian变性在不同时间点趋化表达红色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞(red fluorescence protein bone marrow mesenchymal stem cells,RFP-BMSCs)的归巢能力;探讨经尾静脉移植骨髓间充质干细胞对SD大鼠周围神经crush损伤修复的促进作用。方法周围神经损伤后Wallerian变性在不同时间点对骨髓干细胞归巢能力的影响:成年雄性SD大鼠72只,按体重编号随机分为A和B两组,A组(n=36)经尾静脉注射RFP-BMSCs和生理盐水,B组(n=36)经尾静脉注射RFP-BMSCs和AMD3100(SDF-1/CXCR4信号通路的特异性阻断剂)。每组内按注射时间点的不同,随机分为6小组。在无菌条件下,纵向剪开SD大鼠右后肢背侧皮肤,沿肌间隙分离暴露坐骨神经,并在梨状肌下缘切断坐骨神经,近端结扎,远端旷置,分别在1d、3d、7d、14d、1m、2m行尾静脉RFP-BMSCs+生理盐水(A组)和RFP-BMSCs+AMD3100(B组)注射,并在注射后的第三天行活体成像系统观察。经尾静脉移植BMSCs促神经crush损伤修复的研究:建立SD大鼠5mm坐骨神经crush损伤模型,按体重编号随机分为3组(n=15),每组根据注射内容的不同再随机分为A、B、C三个小组,A组(n=15)经尾静脉注射生理盐水,B组(n=15)经尾静脉注射106RFP-BMSCs,C组(n=15)经尾静脉注射5X106个RFP-BMSCs。在不同的时间点分别应用活体荧光成像系统、坐骨神经指数(sciatic nerve functionindex, SFI)测量、电生理检测和神经肌肉病理学等方法评价干细胞的归巢现象及其对神经crush损伤的修复作用。结果1、随着时间的延长,RFP-BMSCs在发生wallerian变性的坐骨神经中的聚集能力呈现先增高后降低的现象;且相同组内比较在坐骨神经wallerian变性的早期(1d~3d),注射RFP-BMSCs+AMD3100(B组)后的聚集现象明显弱于RFP-BMSCs+生理盐水(A组)。2、活体荧光成像系统显示生理盐水组无荧光信号聚集;1×106干细胞治疗组、5×106干细胞治疗组术侧crush损伤段近端及远端Wallerian变性区域有荧光信号聚集,且5×106干细胞治疗组的荧光信号强于1×106干细胞治疗组;SFI测量证实早在术后两周,实验动物的运动功能开始恢复;在术后2w、4w、6w三个不同时间点,5×106干细胞治疗组实验动物的运动功能的恢复要优于1×106干细胞治疗组组和生理盐水组;同样的,电生理检测和神经肌肉病理学等结果均提示5×106干细胞治疗组的促神经损伤恢复效果优于1×106干细胞治疗组和生理盐水组。结论1、RFP-BMSCs向损伤的周围神经归巢的能力存在先增高后降低的现象,并且在wallerian变性的早期,其归巢现象可能部分受到SDF-1/CXCR4轴的调控,可以被CXCR4特异性拮抗剂AMD3100所抑制,因此,通过干细胞的归巢现象来促进周围神经损伤的修复是一种可行的方法。2、经尾静脉移植的骨髓间充质干细胞可以成功的归巢至crush损伤段近端及远端Wallerian变性区域,并促进神经损伤的恢复。5×106干细胞治疗组的修复作用要优于1×106干细胞治疗组,这对于指导经静脉移植干细胞修复神经损伤有重要意义。
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