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第一部分IgAN动物模型的制备、鉴定及免疫组化目的用黏膜免疫诱导法构建IgAN动物模型,以此模型为基础,探讨IgAN的发病机制及Peyer小结在IgAN中的作用。方法雄性BALB/C小鼠,给予牛血.清白蛋白、注射葡萄球菌肠毒索B诱导IgAN模型。第0周、6周、12周分别用代谢笼收集24小时尿液测定24小时尿蛋白,并尿沉渣红细胞计数。12周去眼球收集血清,测定血清总蛋白(TO))、白蛋白(A1b)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cvs C);肾组织IgA免疫荧光：肾组织HE、PAS及DAB染色：Peyer小结IgA、Bcl-6免疫组化。结果(1)IgAN组和Control组第0w、6w、12w 24h尿蛋白定量分别为(0.61±0.26)mg vs (0.67±0.22)mg.(3.61±0.75)mg vs (0.77±0.27)mg、(4.15±0.82)mg vs (1.09±0.51)mg,IgAN组第0w 24h尿蛋白定量与对照相比无统计学差异(P>0.05),第6w、12w 24h尿蛋白定量分别高于Control组(P<0.01)。IgAN组和Control组第0w、6w、12w尿沉渣红细胞计数分别为(1.90±1.20)个/HP,vs(1.30±0.95)个/HP、(1.80±0.92)个/HP vs (1.50±1.08)个/HP、(2.50±1.18)个HP vs(2.00±0.82)个/HP,IgAN组第0w、6w、12w尿沉渣红细胞计数与Control组相比均无统计学意义(P>0.05)。(2)IgA免疫荧光显示IgAN组40小鼠有33只系膜区有IgA沉积,Control组40只小鼠仅有2只肾小球有少量IgA沉积,IgA沉积于肾小球系膜区,呈典型颗粒状分布。(3)与Control组相比,IgA组血清Alb降低(P<0.05),Cys C升高(P<0.05),TP.BUN.Cr无统计学差异(P＞0.05)。(4)Peyer小结IgA.Bcl-6免疫组化显示两者阳性细胞主要分布于生发中心亮区与暗区交界处,半定量分析显示IgAN组两者染色较Control组增强,差异有显著的统计学意义(P<0.01)。结论牛血清白蛋白、葡萄球菌肠毒素联用可成功诱导IgAN模型,是较为理想的构建IgAN模型的方法,同时提示黏膜免疫可能参与了IgAN的发生。第二部分IgA分泌细胞在Peyer小结中的分化及Tfh细胞的调节作用目的观察分泌IgA的B细胞在Peyer小结中的发育及分化过程,说明Peyer小结在分泌IgA的B细胞分化过程中的重要作用,以及滤泡辅助性T细胞调节B细胞分化成分泌IgA浆细胞的意义。方法在IgAN模型中,分离小肠壁上的Peyer小结,收集细胞于试管中。分管如下：①空白管(仅有细胞)；②细胞+CXCR5-APC;③细胞+CD4-PE;④细胞+CXCR5-APC+CD4-PE;⑤细胞+IgA-FITC；⑥细胞+B220-PerCP:⑦细胞+IgM-PE-Cy7；⑧细胞+IgA-FITC+B220-PerCP+IgM-PE-Cy7；⑨细胞+100ulPBS+APC-CXCR5(4u1)+PE-CD4(4u1) (IgAN)；⑩细胞+100ulPBS+ FITC-IgA(4u1)+PerCP-B220(2.Oul)+PE-Cy7-IgM(1.25u1) (IgAN).流式细胞仪测定Peyer小结中Tfh(CXCR5+CD4+)细胞、B220+IgM+B淋巴细胞、B220+IgA+B淋巴细胞、B220+IgA+浆母细胞、IgA的百分率。结果IgAN模型组和Control组Tfh细胞、B220+IgM+B淋巴细胞、B220+IgA+B淋巴细胞、B220-IgA+浆母细胞、IgA百分率分别为10.6%±2.49%vs 4.88%±1.41%、34.7%±11.1%vs 24.3%±7.84%、7.92%±2.21%vs5.75%±2.10%、5.57%±1.75%vs 3.74%±1.46%、13.5%±3.62%vs 9.49%±2.14%。IgAN组Tfh细胞和IgA白分率与对照相比有显著的统计学意义(P<0.01),B220+IgM+B淋巴细胞、B220+IgA’B淋巴细胞、B220-IgA+浆母细胞分别高于Control组(P<0.05)。结论在IgAN模型鼠Peyer小结中Tfh细胞百分率增加,提示Tfh细胞在介导B细胞分化成为分泌IgA的浆细胞中起调：节作用；Peyer小结B细胞发育并向分泌IgA浆母细胞生成明显占优势,是IgA浆母细胞生成的主要部位,为B细胞向分泌IgA的浆母细胞转化和IgAN发病提供了微环境。第三部分Peyer小结中Tfh细胞功能测定目的测定Peyer小结中抗牛血清白蛋白(抗-BSA)抗体水平，间接反映Peyer小结Tfh细胞功能,探讨IgA肾病Peyer小结中Tfh细胞功能的改变。方法分离Peyer小结,磁珠分选Peyer小结中的CXCR5+CD4+细胞,与自体脾细胞共培养,第8天Western blot测定上清液抗-BSA含量反映Tfh细胞的功能。结果IgAN模型组和Control组细胞培养上清液抗-BSA表达水平分别为0.58±0.10 vs 0.31±0.08。IgAN组Peyer小结抗-BSA浓度较Control组升高,差异有统计学意义(t=2.97,P=0.01)。结论IgAN中,Peyer小结Tfh细胞不仅百分率增加,而且功能明显增强,进一步提示Tfh细胞在介导B细胞分化成为分泌IgA的浆细胞中起重要的调节作用。第四部分Peyer小结中Tfh细胞相关转录因子和细胞因子的表达目的测定Peyer小结Tfh细胞分泌因子白细胞介索-21(IL-21)和转化生长因子-β1 (TGF-β1) mRNA的表达,测定IL-21 Bcl-6, Blimp-1蛋1白质的表达。探讨Tfh细胞相关细胞因子的功能及它们在IgAN中的作用。方法分离Peyer小结,提取总RNA、合成cDNA及进行荧光定量PCR反应,测定IL-21和TGF-β1 mRNA的表达。分离Peyer小结,提取组织蛋白,Western blot测定IL-21、Bcl-6, Blimp-1蛋白质的表达。结果IgAN组和Control组IL-21和TGF-β1 mRNA相对表达值分别为1.67±0.13 vs 1.49±0.13.1、21±0.09vs1.10±0.10。IgAN组IL,-21和TGF-β1 mRNA相对表达值较Control组升高,差异分别有统计学意义(t=2.730,P=0.016；t=2.416,P=0.03)。IgA组IL-21,Bcl-6和Blimp-1(?)目对蛋白质的表达值分别为0.67±0.21,0.60±0.19和1.03±0.07；Control组IL-21,Bcl-6和Blimp-1相对蛋白质的表达值分别为0.45±0.10,0.34±0.21和0.67±0.07。IgAN组IL-21、Bcl-6和B1imp-1蛋白质相对表达值较Control组升高,差异分别有统计学意义(t=2.628,P=-0.025；t=2.665,P=-0.019；t=10.128,P=-0.000)。结论IgA肾病Peyer小结Tfh细胞相关转化因子和细胞因子表达增加,促进B细胞向分泌IgA的浆细胞分化,Peyer小结中Tfh细胞及其相关细胞因子可能参与IgA肾病的发病。第五部分Tfh细胞相关细胞因子促进初始B细胞分化成熟并分泌半乳糖缺乏的lgA1目的观察IgA肾病患儿初始B细胞在Tfh细胞相关因子作用下的诱导成熟过程,探讨Tfh细胞在IgAN发病机制中的作用。方法磁珠分选IgA肾病患儿外周血初始B细胞(CD27-IgD+),加IL-21和TGF-β1等细胞因子共培养,测定细胞培养上清液J链的表达、IgA分泌、半乳糖缺乏的IgAl(Gd-IgA1)水平。结果IgA肾病组和Control组J链的表达相对值、IgA分泌、异常糖基化的IgAl分别为(0.85±0.16)vs(0.63±0.28)、(6.64±0.85) pg/ml vs (6.43±0.51) pg/ml、(85.93±7.91) U/ml vs (73.1±8.24)U/ml。IgAN组J链的表达和IgA分泌水平与对照组相比较无统计学意义(t=1.914,P=0.076；t=0.592,P=0.563),而IgAN组Gd-IgAl水平较Control组显著升高,差异有显著的统计学意义(t=3.182,P=0.007)。结论IgA肾病患儿外周血初始B细胞可分化成熟,并产生异常糖基化的IgAl。Tfh细胞及相关细胞囚子在诱生B细胞成为分泌IgA的浆母细胞及半乳糖缺乏的IgAl过程中起关健的调节作用,参与IgAN发病。