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目的:鉴定油酸(oleic acid,OA)致急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)模型中差异表达蛋白;分别探讨抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ,AT Ⅲ)在OA引起人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMECs-1)损伤中的作用以及A2BAR在OA致ARDS中的作用和A2BAR对过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)诱导人非小细胞肺癌(human non-small cell lung cancer,HNSCLC)A549细胞凋亡的作用及机制。方法:(1)通过尾静脉注射OA建立小鼠ARDS模型,利用i TRAQ技术分析肺组织差异表达蛋白;western-blot验证肺组织中12-LO、Plasminogen、ATⅢ、A2BAR、Polycystin-2及DOCK-2表达。(2)通过OA处理HMEC-1细胞建立体外肺损伤模型,应用western-blot验证细胞中ATⅢ表达;进一步通过si RNA干扰技术下调ATⅢ在HMEC-1细胞中表达,然后给予OA刺激。ELISA法检测HMEC-1细胞培养液中细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α及TGF-β浓度,western-blot检测细胞中ZO-1和MLC磷酸化水平,免疫荧光染色检测F-actin含量,FITC-右旋糖苷transwell实验检测HMEC-1细胞通透性。(3)建立OA致小鼠ARDS模型前30min,腹腔注射A2BAR激动剂(BAY60-6583)和/或A2BAR拮抗剂(PSB1115)。HE染色评估肺损伤程度,western-blot检测肺组织中Cleaved caspase-3表达,TUNEL检测肺泡上皮细胞凋亡率,ELISA法检测小鼠肺组织MPO活性的变化,血气分析仪检测小鼠动脉血Pa O2和Pa CO2的变化。(4)建立H2O2致人肺上皮A549细胞损伤模型,通过A2BAR激动剂(BAY60-6583)和/或A2BAR拮抗剂(PSB1115)进行干预。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,western-blot检测线粒体凋亡通路蛋白及MAPKs家族蛋白表达。(5)通过si RNA干扰技术下调肺上皮A549细胞A2BAR表达,结合应用JNK、ERK或P38抑制剂预处理后,给予H2O2刺激。流式细胞仪检测细胞凋亡率,western-blot检测细胞中Cleaved caspase-9表达。结果:(1)OA致小鼠ARDS模型中,有849种蛋白发生显著变化,其中545种蛋白表达上调,304种蛋白表达下调。western blot进一步验证结果表明肺组织中12-LO、Plasminogen、ATⅢ、A2BAR、Polycystin-2及DOCK-2蛋白表达升高。(2)OA刺激导致HMEC-1细胞ATⅢ蛋白明显增加。在si RNA-ATII组IL-6、IL-1β、TNF-α及TGF-β浓度升高,ZO-1表达下降而MLC磷酸化水平明显升高,F-actin含量增多,细胞通透性增加。(3)经BAY60-6583预处理后,OA引起的急性肺损伤程度降低且肺组织湿/干比下降,肺组织Cleaved caspase-3蛋白表达降低,肺组织细胞凋亡率下降,肺组织MPO活性降低,动脉血Pa O2升高和Pa CO2降低。而PSB1115预处理可阻断BAY60-6583对OA所致急性肺损伤的相应保护作用。(4)经BAY60-6583预处理后,H2O2引起细胞凋亡率降低,线粒体膜电位升高,线粒体中Bax降低,胞浆中Bcl-2和细胞色素C降低。PSB1115预处理可阻断BAY60-6583对细胞的这种保护作用。(5)H2O2可引起A549细胞中p38、ERK1/2、JNK信号通路激活,BAY60-6583预处理降低其磷酸化水平,PSB1115预处理可阻断BAY60-6583对p38、ERK1/2、JNK磷酸化的抑制。然而,p38和ERK1/2抑制剂可明显减轻由下调A2BAR预处理加重H2O2所致的细胞凋亡。结论:(1)OA显著引起小鼠肺组织内蛋白表达变化,如ATⅢ、A2BAR、12-LO、Plasminogen、Polycystin-2及DOCK-2表达升高。(2)ATⅢ通过抑制OA引起的HMEC-1细胞通透性增加和炎症反应,减轻肺损伤。(3)激活A2BAR可缓解OA引起的肺泡上皮细胞损伤,从而减轻肺损伤。(4)激活A2BAR在抑制H2O2引起的A549细胞凋亡中发挥重要作用,其机制可能是通过阻滞p38和ERK信号通路的激活。