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目的:利用大鼠哮喘模型,评价平喘颗粒对哮喘的治疗作用,探究平喘颗粒治疗的作用靶点,阐述平喘颗粒对哮喘的分子作用机制,为平喘颗粒的临床应用提供理论依据。方法:80只大鼠随机分成4组:对照组、模型组、地塞米松(1mg/kg)组、平喘颗粒(5.4g/kg)组,以卵清蛋白与氢氧化铝联合吸入法构建哮喘大鼠模型,末次致敏后5天分别治疗干预,每日1次,遇激发日则在激发前1h给予治疗,末次激发24h后收集支气管肺泡灌洗液、肺组织,对相关指标进行评价。体内实验:1.采用HE染色法观察肺组织病理学变化,并凭借病理图像分析系统,定量分析WAi/Pi、WAm/Pi及N/Pi比值;2.透射电镜观察肺组织超微结构,评价其影像学变化;3.应用全自动五分类血液分析仪对BALF及血液中EOS进行计数检测;4.采用ELISA酶联免疫法检测血清中TIgE、OVA sIgE及EOS相关活性物质ECP和Eotaxin的表达;5.免疫印迹Western Blot法检测肺组织中Notch信号通路Notch 1、2、3、4,Jagged1、2、Delta1、3、4及Hes蛋白的含量,检测STAT信号通路STAT1、3、4、5、6及其磷酸化蛋白的含量;6.根据Western Blot结果,Real-Time PCR法检测肺组织中Notch信号通路 Notch1、2、4,Jagged1、2、Delta1、3 及 HesmRNA 的表达水平,检测STAT信号通路P-STAT1、3、4、5、6mRNA的表达水平;体外实验:1.应用Percoll不连续密度梯度分离法分离BALF中EOS,采用Wright-Giemsa染色法鉴定分离的细胞;2.免疫印迹Western Blot法检测EOS中Notch信号通路Notch 1、2、3、4,Jagged1、2、Delta1、3、4及Hes蛋白的含量,检测STAT信号通路STAT1、3、4、5、6及其磷酸化蛋白的含量;3.根据Western Blot结果,Real-Time PCR法检测肺组织中Notch信号通路 Notch1、2、3、4,Jagged1、Delta1、3、4 及 Hes mRNA 的表达水平,检测STAT信号通路P-STAT1、3、4、5、6mRNA的表达水平;结果:体内实验:1.肺组织病理学观察结果显示,哮喘模型组血管腔变窄,血管周围及肺组织大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞和嗜酸性粒细胞为主,基底膜明显增厚,管壁平滑肌、支气管外层结缔组织明显增生;地塞米松组和平喘颗粒组炎性浸润现象减轻,改善作用明显;图像定量分析显示,相比于对照组,模型组WAi/Pi、WAm/Pi及N/Pi比值显著升高,差异具有显著性(P<0.01),各治疗干预组可明显降低WAi/Pi、WAm/Pi及N/Pi比值,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。2.透射电镜扫描超微结构显示,模型组EOS细胞明显增多,线粒体肿胀,嵴模糊甚至部分丢失,出现空泡变性现象,板层小体数量明显减少且排空增多,基底膜变厚,染色质聚集;地塞米松与平喘颗粒治疗组细胞损伤程度减轻,EOS细胞数量减少,线粒体空泡现象减轻,嵴较清晰,基底膜较完整。3.血液分析仪检测显示,模型组BALF及血液中EOS计数均显著升高(P<0.01),各治疗干预组EOS数量明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。4.ELISA检测结果表明,模型组血清中TIgE、OVAsIgE含量及肺组织中EOS活化标记物ECP、Eotaxin均显著升高(P<0.01);与模型组相比,各治疗干预组均明显降低以上各指标的含量,差异具有显著性(P<0.05,P<0.01)。5.Western Blot 和 Real-Time PCR 结果显示,模型组 Notch1、Notch2、Notch4 及 Jagged1、Jagged2、Hes、P-STAT1、3、5、蛋白和 mRNA 表达显著上调,Delta1、Delta3、P-STAT4蛋白和mRNA表达明显下调,差异具有显著性(P<0.01),各治疗干预组不同程度改善以上mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。体外实验:1.BALF分离的EOS经鉴定,Wright-Giemsa染色呈阳性,符合EOS形态学特征,细胞为EOS。2.Western Blot 结果显示,模型组 Notch1、Notch2、Notch4 及 Jagged1、Jagged2、Delta4、Hes、P-STAT1、3、5、蛋白表达显著上调,Notch3、Delta1、Delta3、P-STAT4蛋白表达明显下调,差异具有显著性(P<0.01),各治疗干预组不同程度改善以上蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。3.Real-Time PCR 结果显示,模型组 Notch1、Notch2、Notch4 及 Jagged1、Delta4、Hes、P-STAT1、3、5、6mRNA 表达显著上调,Notch3、Delta1、Delta3、P-STAT4mRNA表达明显下调,差异具有显著性(P<0.01),各治疗干预组不同程度改善以上mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:1.哮喘模型中,典型的效应细胞EOS及其活性物质呈高表达状态,可作为生物标记物用于抗哮喘疗效评价,平喘颗粒可显著降低E O S的高表达。2.平喘颗粒对哮喘具有明确的治疗作用,且治疗效果与地塞米松相当。3.平喘颗粒具有抑制哮喘的作用,分子机制与其抑制Notch及STAT信号通路的激活密切相关。4.平喘颗粒对哮喘模型中EOS具有调节作用,作用机制与下调Notch及STAT信号通路的表达密切相关。5.平喘颗粒治疗哮喘作用明确,分子作用机制为抑制EOS中Notch及STAT信号通路表达,降低EOS含量,从而缓解哮喘症状。