目的:基于“风温伏肺”理论,建立肺炎支原体肺炎(MPP)Balb/c幼鼠模型,探讨MPP小鼠CARDS TX/NLRP3/Caspase-1通路和CARDS TX/My D88/NF-κB/NLRP3通路相关炎症因子动态变化,阐释清肺透邪汤干预MPP小鼠CARDS TX/NLRP3炎性小体/Caspase-1活性的作用靶点,阐释清肺透邪汤对MPP小鼠CARDS TX/My D88/NF-κB/NLRP3信号通路及外周血相关因子的调控作用,阐释清肺透邪汤拆方对MPP小鼠作用靶点,为清肺透邪汤进一步研究提供实验基础和依据。材料与方法:1.在培养基中对MP菌株进行连续传代,培养MP采用CCU/ml方法测定MP浓度,取适当浓度MP菌液备用。2.采用滴鼻接种MP菌液诱导幼龄Balb/c小鼠致肺炎,观察小鼠一般状态、肺指数、肺组织外观、肺组织病理改变等方面差异,进行模型鉴定。3.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术及蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测MPP幼鼠不同时间点肺组织CARDS TX、NLRP3、ASC及Caspase-1表达水平,比较清肺透邪汤及其拆对CARDS TX/NLRP3/Caspase-1通路的影响。4.采用免疫组化SP法检测MPP幼鼠肺组织NF-κB表达,比较清肺透邪汤及其拆方对NF-κB信号通路调控作用。5.采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测MPP幼鼠外周血中Myd88、IL-1β、IL-8的变化,比较清肺透邪汤及其拆方对NF-κB信号通路上游调控分子My D88、下游炎性因子IL-8的影响,及对NLRP3炎性小体下游释放促炎因子IL-1β的影响。结果:1.小鼠肺组织外观变化:正常组(sham组)小鼠取出的肺组织表面呈淡红色,表面光泽,质地柔软,无病理性瘀斑;模型组(MP组)小鼠肺组织在MP滴鼻接种第3天解剖无明显改变,第7天肺组织呈暗红色,表面可见大量的肺实变病灶,看见大量瘀点,第10天肺组织病变面积增大,成豆腐渣样改变。2.小鼠肺脏病理组织学变化:sham组小鼠肺泡结构较为均匀与清晰,肺泡内无渗出,支气管和血管周围及肺泡间隔中偶见淋巴细胞和巨噬细胞浸润;MP组小鼠肺组织中可见间质性炎症改变,肺泡内有渗出肺泡间隔增宽,在支气管和血管周围及肺泡间隔有大量的淋巴细胞和巨噬细胞浸润3.各组CARDS TX m RNA表达情况:sham组可以检测到少量CARDS TX m RNA表达,MP组第3、7、10、14天小鼠肺组织中的CARDs TX m RNA表达持续升高,于第7天达峰值,之后降低。与sham比较,清肺透邪汤(QFTXT)及拆方(清透、清润)、阿奇霉素各(AZM)治疗组表达水平均有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。与MP相较,QFTXT在第3、7、10、14天CARDS TX m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);清透方(QT)、清润组(QR)表达水平持有所下降,作用均显著(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中CARDS TX m RNA表达水平有所升高,两者在第14天差异不显著(P>0.05);与AZM比较,QFTXT在第3、7天有显著性差异(P<0.05),而在第10、14天差异无显著性(P>0.05)。4.各组NLRP3、ASC及Caspase1 m RNA表达情况:sham组可以检测到少量NLRP3、ASC、Caspase1 m RNA表达,MP组第3、7、10、14天小鼠肺组织中的NLRP3、ASC、Caspase1 m RNA表达持续升高,于第3天达峰值,之后略有降低。与sham比较,QFTXT、QT、QR、AZM组NLRP3、ASC、Caspase1 m RNA表达水平均有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。与MP相较,QFTXT在第3、7、10、14天NLRP3、ASC、Caspase1 m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);QT、QR表达水平持有所下降,作用均显著(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中NLRP3、ASC、Caspase1 m RNA表达水平有所升高,两者在第14天差异不显著(P>0.05);与AZM比较,QFTXT在第3天有统计学显著性差异(P<0.05),而在第7、10、14天无统计学显著性差异(P>0.05)。5.各组CARDS TX蛋白表达情况:sham组可以检测到少量CARDS TX蛋白表达,MP组CARDs TX m RNA表达持续升高,于第7天达峰值,之后降低。与sham比较,QFTXT、QT、QR、AZM组表达水平均有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。与MP相较,QFTXT在第3、7、10、14天CARDS TX蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);QT、QR组CARDS TX蛋白表达水平持有所下降,作用均显著(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中CARDS TX蛋白表达水平有所升高,两者在第14天差异不显著(P>0.05);与AZM比较,QFTXT在第3、7天有显著性差异(P<0.05),而在第10、14天差异无显著性(P>0.05)。6.各组NLRP3、ASC及Caspase1蛋白表达情况:sham组可以检测到少量NLRP3、ASC、Caspase1蛋白表达,MP组第3、7、10、14天小鼠肺组织中的NLRP3、ASC、Caspase1蛋白表达持续升高,于第3天达峰值,之后略有降低。与sham比较,QFTXT、QT、QR、AZM组NLRP3、ASC、Caspase1蛋白表达水平均有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。与MP相较,QFTXT在第3、7、10、14天NLRP3、ASC、Caspase1 m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),QT、QR表达水平持有所下降,作用均显著(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中NLRP3、ASC、Caspase1蛋白表达水平有所升高,两者在第14天差异不显著(P>0.05);与AZM比较,QFTXT在第3天有统计学显著性差异(P<0.05),而在第7、10、14天无统计学显著性差异(P>0.05)。7.各组NF-κB蛋白表达情况:sham组中可以检测到少量NF-κB蛋白表达,MP组小鼠肺组织NF-κB蛋白水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与sham比较,QFTXT、QT、QR、AZM组NF-κB蛋白表达水平均有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。与MP相较,QFTXT组NF-κB蛋白水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);QT、QR表达水平持有所下降,作用均显著(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中NF-κB蛋白表达水平有所降低,两者差异不显著(P>0.05)。8.各组外周血My D88的情况:与sham相比,MP组My D88含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且在第10天达到峰值;与MP组相较,QFTXT、QT、QR、AZM均可以下调My D88的表达(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中My D88含量有所升高,QR升高程度更大,在第14天无显著性差异(P>0.05);与AZM比较,QFTXT第3、7、10、14天作用无统计学显著性差异(P>0.05)。9.各组外周血IL-1β的情况:与sham相比,MP组IL-1β含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且在第3天达到峰值;与MP组相较,QFTXT、QT、QR、AZM均可以下调IL-1β的表达(P<0.05);与QFTXT比较,QT、QR中IL-1β含量有所升高,QR升高程度更大,在第14天无显著性差异(P>0.05);与AZM比较,QFTXT第3、7、10、14天作用无统计学显著性差异(P>0.05)。10.各组外周血IL-8的情况:与sham相比,MP组IL-8含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且在第3天达到峰值;与MP组相较,QFTXT、AZM均可以下调IL-8的表达(P<0.05);与AZM比较,QFTXT在第3、7、10、14天作用无统计学显著性差异(P>0.05)。结论:1.清肺透邪汤可以抑制MPP小鼠肺组织内CARDS TX表达,减轻MP对肺组织的直接损伤。2.清肺透邪汤对MPP小鼠保护作用机制可能为(1)调控My D88/NF-κB信号通路及NLRP3炎性小体活化,减弱炎症反应;(2)抑制Caspase-1活化,使Caspase-1依赖细胞焦亡通路免疫应答减弱。3.清肺透邪方组在降低CARDS TX表达、调控信号转导及抑制免疫炎症反应等方面均优于清透组、清润组,两部分起效组份起互补作用,其中以清透为主,辅以清润,可达到去邪留津不伤正气的保护作用。